HMGB1抑制剂对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭、迁移的影响及机制研究

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目的:体外观察不同浓度高迁移率蛋白B1抑制剂—正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2和ACC-M侵袭、迁移的影响并初步探讨其作用机制。方法:1.用不同浓度的正丁酸钠作用ACC-2、ACC-M细胞24小时,MTT法测定细胞的增殖率,探寻药物作用的最佳浓度,采用普通光学倒置显微镜观察细胞的形态变化。2.Transwell小室实验检测药物对ACC-2、ACC-M细胞侵袭、迁移能力的影响。3.通过Western-blot和实时荧光定量PCR分别检测药物作用后两种细胞HMGB1和TLR4mRNA和蛋白的表达。结果:1.正丁酸钠在0.625mM、1.25mM、2.5mM、5mM、10mM浓度时对ACC-2、ACC-M细胞具有显著的抑制增殖作用,且抑制作用随浓度升高而增强(P<0.05)。2.Transwell小室实验证实五个浓度组的正丁酸钠均可抑制ACC-M细胞体外侵袭和迁移能力,2.5mM、5mM、10mM浓度组的药物可以抑制ACC-2细胞的迁移能力,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);五个浓度组的药物对ACC-2细胞侵袭能力的影响与对照组相比无明显差异(P>0.05)。3.Western-blot和实时荧光定量PCR结果显示五个浓度组的正丁酸钠处理ACC-M细胞后,可下调细胞HMGB1和TLR4蛋白及mRNA的表达,且具有浓度依赖性,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);2.5mM、5mM、10mM浓度组的药物可以下调ACC-2细胞HMGB1和TLR4mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。相关性分析显示:TLR4蛋白表达的降低与HMGB1的抑制呈正相关(r=0.810,P<0.05)。结论:HMGB1的表达对涎腺腺样囊性癌细胞的体外生物学行为发挥着重要作用,抑制其表达可以显著降低ACC-M细胞的侵袭和迁移能力,抑制剂浓度较高时还能降低ACC-2细胞的迁移能力,TLR4可能作为HMGB1的受体,参与HMGB1对涎腺腺样囊性癌细胞体外生物学行为的调节,为筛选临床靶向药物治疗涎腺腺样囊性癌提供初步的理论依据。
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