背景和目的：近年来乳腺癌的发病率和死亡率增长速度较快,全世界每年患乳腺癌的女性约130万人,而死于乳腺癌的有50万人。虽然我国的乳腺癌属于低发,但近年来其发病率增长幅度较快,预测20年后将会成为我国发病率最高的恶性肿瘤。雌激素受体(estrogen receptor ER)在乳腺癌的发生发展过程中,扮演着重要角色。在体内通过与雌激素的结合,激活含雌激素应答元件基因和含有其他转录因子结合元件基因的表达,进而导致乳腺癌的发生。通常情况下,以ER基因表达情况的不同可将乳腺癌分为ER阴性乳腺癌和ER阳性乳腺癌两种。其中ER阴性乳腺癌约占20%-35%,其恶性程度高、发展迅速、有较高的局部复发率,并易发生肺、肝、骨及脑等重要脏器的转移,预后较差。由于缺乏相应的受体不能进行内分泌和生物治疗,所以这类特殊乳腺癌的治疗仅限于化疗,但疗效欠佳。因此,作为一个分子标记物,ER在乳腺癌的内分泌治疗中进行效果预测、评估激素依赖性等方面具有重要的意义。DNA甲基化和染色体重组是当前研究ER阴性乳腺癌中ER基因失活的两大主要学说。甲基化在肿瘤的发生、发展中有着重要作用,但又是一可逆过程。从理论上来说,如果使用药物对甲基化的抑癌基因和癌基因进行人为逆转,即可使因甲基化失活的基因重新获得表达。三氧化二砷(As2O3)为中药砒霜的主要成分,近年来发现其对白血病、原发性肝癌等多种肿瘤治疗取得了较好的效果。主要通过诱导细胞凋亡来发挥其细胞毒性作用,如今多项研究证明其具有甲基化抑制作用。本实验通过研究不同浓度的As2O3对人ER阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435进行药物诱导,使其基因启动子区CpG岛部分脱甲基而使其重新表达有功能的ERα,从而使得ER阴性乳腺癌细胞恢复对内分泌治疗药物的敏感性。材料与方法：(1)常规培养雌激素受体(ERα)阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,细胞浓度调整为5×105/ml后换含As2O3的培养液,至AS2O3终浓度分别为0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L,连续培养72h。以同期培养不加药的MDA-MB-435细胞作为阴性对照,ERα阳性人乳腺癌细胞株MCF-7作为阳性对照。(2) RT-PCR方法检测经不同浓度As2O3处理后的MDA-MB-435细胞ERα的mRNA表达情况。(3)甲基化特异性PCR (Methylation Specific PCR, MSP)方法检测经不同浓度As2O3处理后的MDA-MB-435细胞ERαDNA的5’-CpG岛甲基化的情况。(4) Western blot方法检测经不同浓度As2O3处理后的MDA-MB-435细胞ERα的蛋白表达情况。(5)免疫组化方法检测经不同浓度As2O3处理后的MDA-MB-435细胞ERα的蛋白表达情况。(6)MTT方法检测经不同浓度As2O3处理后的MDA-MB-435细胞,再经三苯氧胺(TAM)处理,观察各组细胞的生长受抑情况。(7)统计学方法：应用统计学处理软件SPSS 16.0,X2检验进行统计学分析,·差异显著性标准设为P<0.05。结果：(1) RT-PCR法检测阴性对照组无ERαmRNA基因；0.5μmol/L组未扩增出ERαmRNA基因；1.0μmol/L组、2.0μmol/L组、4.0μmol/L组均扩增出ERαmRNA基因。(2)甲基化特异性PCR法检测阴性对照组仅甲基化引物扩增出特异PCR条带；0.5μmol/L组、1.0μmol/L组、2.0μmol/L组、4.0μmol/L组甲基化和去甲基化引物均扩增出特异PCR条带。(3)经Western blot检测证实阴性对照组未显示蛋白条带；0.5μmol/L组也未显示蛋白条带,但1.0μmol/L组、2.0μmol/L和4.0μmol/L组显示出蛋白条带。(4)经免疫组化法检测证实阴性对照组细胞阳性率为7.4%；/L组、/L组、/L组、/L组细胞阳性率分别为7.8%、43.8%、78.2%、41.5%。(5)MTT法检测TAM作用于经As203处理的MDA-MB-435细胞后,细胞增殖明显受抑。阴性对照组受抑率为10.7%;0.5μmol/L组、/L组、2.0μmol/L组、/L组细胞受抑率分别是14.9%、30.7%、43.1%、56.6%。结论：适当浓度的As203通过对部分细胞的去甲基化作用,使ERa阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞ERa mRNA和蛋白重新表达,并可恢复对内分泌治疗药物(三苯氧胺)的敏感性,从而为ERa阴性乳腺癌患者实现内分泌治疗提供可靠的理论依据。