CD3单抗联合化疗预处理方案在小鼠半相合骨髓移中预防GVHD的机制研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiangfeng007
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目的:明确在使用白消安联合氟达拉宾预处理化疗小鼠半相合骨髓移植移植物抗宿主(Haploidentical hematopoietic stem cell transplantation Graft versus leukemia,Haplo-HSCT GVHD)模型上,加用CD3单抗预防GVHD同时保留有移植物抗白血病(Graft versus leukemia GVL)。初步探究CD3单抗预处理在小鼠Haplo-HSCT模型预防GVHD机制.方法:应用白消安联合氟达拉滨化疗预处理,以C57BL/6小鼠♂和BALB/C小鼠♀杂交的子一代小鼠(CB6F1)为受者,以C57BL/6为供者建立半相合骨髓移植GVHD模型。将CB6F1小鼠分为3组,第一组以CD3单抗联合白消安(15ug/g)和氟达拉滨(10ug/g)预处理,第二、三组以白消安联合氟达拉滨预处理,第一、二组移植C57BL/6的去除T细胞骨髓细胞(TCDBM)5*106和脾细胞(SPL)100*106(Anti-CD3组和SPL组),第三组只移植供者TCD-BM 5*106(BM组)。应用流式细胞术验证供者细胞的植入情况,并通过观察F1受者小鼠移植后体重的变化、a GVHD的临床表现、生存情况及靶器官的组织病理,对比CD3单抗预处理组和化疗预处理组GVHD模型小鼠的a GVHD的严重程度。在观察到CD3单抗可以减轻GVHD后,探究受者小鼠CD3预处理后GVHD减轻的同时是否保留有GVL作用,在上述CD3单抗预处理半相合骨髓移植的GVHD模型基础上,不同数量SPL细胞与BCL1细胞配伍,根据Anti-CD3组生存率和BM组肿瘤模型成功率确定移植时静脉注射TCD-BM 5*106,SPL减少为50*106,于移植当天腹腔注射BCL1细胞0.5*106,观察F1生存情况,并且在移植后3-4周应用流式细胞术检测受者外周血和脾脏BCL1浸润情况,明确CD3单抗预处理后仍然保留有移植物抗白血病的功能。更进一步研究CD3单抗预处理减轻GVHD的机制,应用流式细胞术检测各靶器官中供者CD4+及CD8+T细胞的浸润情况;受者肝脏和脾脏中供者CD4+及CD8+T细胞的IFN-γ和TNF-a的表达情况,说明CD3单抗预防GVHD作用机制。结果:(1)GVHD模型建立:沿用实验组原有CD3单抗(5ug/g)移植前13天(d-13)和8天(d-8)各给药一次,白消安(15ug/g)和氟达拉滨(10ug/g)移植前5-2天(d-5—d-2),一天两次腹腔注射,按上述化疗方案和分组方式预处理小鼠后,移植时回输C57BL/6供者小鼠的5*106去除T细胞骨髓细胞加100*106脾细胞。后期观察到典型的体重减轻、腹泻、弓背、脱毛等a GVHD临床症状,流式验证供者CD4+T细胞、CD8+T细胞成功植入,成功建立C57BL/6→CB6F1半相合骨髓移植模型。(2)CD3单抗预处理疗效:Anti-CD3组生存率明显高于SPL组;移植后体重下降缓慢;GVHD症状没有或减轻;移植后第10天取受者小鼠的靶器官病理组织GVHD评分较SPL组明显减轻(P<0.05)。(3)全身肿瘤模型:环磷酰胺预处理CB6F1小鼠计量确立,腹腔注射BCL1细胞后3-4周,流式细胞术检测小鼠BCL1细胞验证全身肿瘤模型建立。(4)GVL模型建立:在CD3单抗预处理在小鼠Haplo-HSCT模型基础上,确定移植时静脉输注脾脏(50*106)和腹腔注射BCL1细胞(0.5*106)配伍;移植后3-4周流式细胞术确定Anti-CD3组与BM组对比未检测到BCL1,说明CD3预处理仍保留有GVL作用。(5)CD3单抗预处理预防GVHD的机制:Anti-CD3组流式细胞术检测受者靶器官供者的CD4+、CD8+T细胞比例明显减少(P<0.05);Anti-CD3组移植后第10天受者脾脏及肝脏中供者CD4+、CD8+细胞表达IFN-γ、TNF-a明显减少(P<0.05)。结论:1.CD3单抗可以有效的预防小鼠半相合骨髓移植模型中GVHD。2.CD3单抗可以有效的预防小鼠半相合骨髓移植模型中GVHD同时保留有GVL作用。3.CD3单抗是通过影响供者CD4+、CD8+细胞减少侵入受者靶器官而起预防GVHD作用的。4.CD3单抗是通过影响受者靶器官中供者CD4+、CD8+细胞的IFN-γ、TNF-a表达预防GVHD。
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