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目的观察高糖对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)产生活性氧和核因子-κB( NF-κB)、骨桥蛋白(OPN)的影响,探讨其与糖尿病肾病氧化应激机制的关系,并应用还原型谷胱甘肽进行干预,以探讨该药治疗糖尿病肾病的作用及可能的机制。方法四甲基偶氮哇盐(MTT)比色法观察不同浓度的还原型谷胱甘肽作用48小时对HK-2细胞增殖的影响,确定合适的还原型谷胱甘肽实验浓度。将体外培养的人肾小管上皮细胞分为低糖对照组(N)、高糖组(H)、高糖+GSH(1mmol/L)组、高糖+GSH(5mmol/L)组及高糖+GSH(10mmol/L)组五组。培养24h、48h及72h后,用分光光度比色法测定上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,用RT-PCR测定细胞内NF-κBmRNA的变化,及用酶联免疫吸附法测定上清液中OPN的含量。并于培养6h后,用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。采用单因素方差分析(One-Way ANOVA Test)比较各组数据之间的差异。结果1高糖组SOD活力显著低于正常对照组(P<0.01),三组浓度的还原型谷胱甘肽均可增加SOD活力(P<0.05);高糖组MDA含量明显高于正常对照组(P<0.01),三组浓度的还原型谷胱甘肽均可减少MDA含量(P<0.01),且均呈剂量依赖性。2 NF-κBmRNA的表达与MDA相似,高糖组明显高于正常组(P<0.01),并呈时间依赖性,高糖培养组同时加入还原型谷胱甘肽,NF-κB的高表达受到抑制(P<0.05) ,且抑制作用随还原型谷胱甘肽浓度的增加而增强,呈剂量依赖关系。3在高糖组HK-2细胞上清液中OPN含量明显高于正常组(P<0.01),三组浓度的还原型谷胱甘肽均可减少OPN表达(P<0.01)。4 SOD与MDA、NF-κB及OPN均存在着负相关关系,MDA、NF-κB及OPN各因子间均存在着正相关关系,提示以上因子均参与了高糖对HK-2细胞的损伤过程,可能相互之间具有协同作用。5高糖可造成肾小管上皮细胞凋亡,使用还原型谷胱甘肽可明显抑制高糖所致的肾小管细胞凋亡。结论1高糖能够刺激HK-2细胞氧自由基的产生以及NF-κB及OPN的表达;2还原型谷胱甘肽抑制了高糖环境中HK-2细胞氧自由基的产生以及NF-κB及OPN的高表达,从而可能抑制细胞外基质的合成和肾间质纤维化。3还原型谷胱甘肽能抑制高糖环境中HK-2细胞的调亡。