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第一部分：CD34阳性造血细胞的微小残留病检测 目的：通过免疫磁珠法纯化CD34~+细胞，探讨用荧光原位杂交技术检测其中微小残留病的敏感性。 材料与方法：10例发病时白血病细胞高表达CD34抗原的白血病患者在缓解状态时取其骨髓细胞，利用MiniMACS提纯CD34+~细胞，流式细胞仪检测提纯前后标本中CD34~+细胞比例。将纯化前标本和CD34~+细胞分别用FISH技术进行微小残留病检测，结果用组间自身配对t检验方法进行统计分析。 结果：纯化前单个核细胞平均含有CD34~+细胞比例为(0.7±0.2)％，纯化后CD34~+细胞平均比例为(90.4±3.4)％。纯化前白血病相关基因平均阳性率为1.8％，10例中4例为阳性，纯化后上升为4.7％，10例中9例为阳性。纯化后结果显著高于纯化前水平，P值为0.037。 结论：通过纯化CD34~+细胞，再用FISH技术检测其中微小残留病，可明显提高微小残留病检出率。 第二部分：CD34阳性造血细胞形貌研究 目的：应用光学及原子力显微镜研究健康人、初发急性髓细胞白血病(M2b)患者的骨髓及健康人、治疗后持续缓解期白血病患者、系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血的CD34~+细胞形貌特征，比较相互间差异。 材料与方法：应用MACS纯化CD34~+细胞，流式细胞仪检测纯化前后样本的CD34~+细胞比例。将健康人骨髓及外周血CD34~+细胞和初发急性髓细胞白血病(M2b)骨髓CD34~+细胞分别制作成涂片，应用瑞氏-吉姆萨染液进行染色，在光学显微镜下观察。将健康人和初发急性髓细胞白血病(M2b)骨髓各1例的CD34~+细胞制成树脂包埋块，利用超薄切片机切成厚度为60nm的薄片，分别用原子力显微镜观测细胞内部结构。原子力显微镜观测细胞表面形貌时，各组每例患者随机观测20个细胞，每个细胞不同部位做2μm×2μm图像5幅。将5幅图像的平均粗糙度、均方根粗糙度、表面颗粒平均高度的平均值作为该细胞的参数。各组的参数利用单因素组间方差分析方法进行比较。 结果:研究对象纯化前的CD34+细胞平均比例为(l .6赶0.25)%，应用M而MACS纯化后的平均比例为(91士2.4)%，应用ClillMACs纯化后的平均比例为(9牡2.7)%。光学显微镜观察发现初发急性髓细胞白血病(MZb)组CD3矿细胞形态与其它组有区别，健康人骨髓及外周血CD3旷细胞形态类似。原子力显微镜观察细胞内部结构不能区分来自健康人和初发急性髓细胞白血病患者(MZb)的CD34+细胞。当原子力显微镜成像范围在10xlopm时，可分辨出核仁和部分胞浆内线粒体等细胞器;当原子力显微镜成像范围在2 xZpm时，细胞内部结构被细小的树脂颗粒所掩盖，不能分辨细胞结构。原子力显微镜观察各组细胞表面形貌发现当成像范围在10x 10pm以上时，可将细胞整体模拟成像。当成像范围在ZXZpm时，细胞表面观测到大小深浅不一的凹陷及颗粒状突起。组间统计学比较发现初发急性髓细胞白血病(MZb)组在均方根粗糙度、平均粗糙度、表面颗粒平均高度方面高于其它四组。 结论:免疫磁珠技术可纯化单个核细胞中的cD34+细胞，其纯度达到形态学研究的需要。光学显微镜不能辨别健康人骨髓、外周血来源的CD3旷细胞，但可将这两种CD34+细胞与初发急性髓细胞白血病患者(MZb)骨髓来源的CD3矿细胞相区别。原子力显微镜可观测细胞的内部结构，初步结果未发现健康人cD34+细胞与CD34+白血病细胞内部结构存在差异。原子力显微镜可观测细胞表面形貌，初发急性髓细胞白血病(MZb)组在均方根粗糙度、平均粗糙度、表面颗粒平均高度方面明显高于其它来源的cD34+细胞。