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菜用大豆[Glycine max (L.) Merr.]营养价值高,深受消费者青睐。随着市场需求的扩大,其栽培面积正迅速增加。而土壤盐渍化和次生盐渍化的日益加剧,使菜用大豆的产量和品质受到严重影响。本研究从耐盐南瓜砧木品种中克隆了脯氨酸合成酶基因CmP5CS,并遗传转化菜用大豆,获得转基因植株。主要研究结果如下：1.采用同源克隆法结合RT-PCR从南瓜砧木品种‘帝王新土佐’(Cucurbita maxima × C. moschata cv. Shintosa Supreme)叶片中克隆出△’-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因的编码区序列,长度为2,154 bp,编码717个氨基酸,命名为CmP5CS (GenBank登录号：JN606859)。与甜瓜P5CS核苷酸序列相似性为92.34%,该基因具有高等植物P5CS蛋白共有的结构域与结合位点：ATP结合位点、2个亮氨酸结构域、NADPH结合位点、谷氨酰激酶(GK)结构域和谷氨酸半醛(GSA)结构域。2.利用点突变和重叠延伸PCR技术改变CmP5CS序列中特定位置碱基,消除目的基因内部Sac I和Xba I的酶切识别位点,将酶切及测序结果正确的CmP5CS基因定向插入到植物双元表达载体pCMBIA3301的CaMV35启动子和NOS终止子中间,即成功构建了CmP5CS基因抗除草剂植物表达载体pCMBIA3301-CmP5CSm,用冻融法将其转入农杆菌LBA4404。3.比较了品种、基本培养基种类、植物生长调节物质配比等因素对菜用大豆子叶节不定芽再生率的影响。在B5+1 mg·L-1 TDZ+0.05 mg·L-1 NAA+5 mg·L-1 AgNO3的培养基上,6个菜用大豆品种的不定芽诱导率在53.5%到88.9%之间,其中‘理想95-1’,‘绿领1号’、‘绿领3号’的不定芽再生频率分别达到88.9%,87.5%和83.3%,建立了菜用大豆高效不定芽再生技术体系。4.探讨了基因型、共培养条件和选择压等因素对菜用大豆子叶节遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌侵染后,菜用大豆材料‘NY-1001’的GUS瞬时表达率显著高于其它15个品种。共培养基pH值为5.4,L-半胱氨酸(L-Cys)和乙酰丁香酮(AS)浓度分别为3 mM和200 μM时,‘NY-1001’的GUS瞬时表达率最高,三因素对该材料转化效率影响的主次顺序为：L-Cys>pH值>AS。共培养结束一周后加入筛选剂bialaphos,选择压力确定为4 mg·L-1。抗性芽转入含有0.5 mg·1-1 GA3的伸长培养基中诱导芽伸长,在含有1mg·L-1IBA的培养基中诱导生根。试验共获得8棵‘NY-1001’T0代转基因植株,平均转化效率为1.06%。8棵植株均表现出对除草剂Basta的抗性。PCR及Southern blot鉴定证明外源基因已经整合到大豆基因组中。