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传统化学农药的长期使用带来种种弊端,随着人们生活质量的提高和对生态环境的关注,使得化学农药的发展受到了来自各方面的限制。世界各国农药界在寻找新型生物农药时,又将注意力转移到天然产物上来。在天然产物中,对植物源农药的研究与开发最为人们关注,已成为新型农药创制的热点。本文通过化学和仪器分析方法结合生物测定技术,研究了飞廉提取物对3种病原菌的抑菌作用。分别从样品采集时间、提取部位、提取溶剂、提取方法方面系统的研究了飞廉抑菌活性物质的最佳提取方案。并对飞廉乙醇提取物进行了成分预分析和稳定性试验,同时采用生物测定活性示踪对飞廉乙醇提取物进行了萃取分离、柱层析、固相萃取分离,利用气相色谱与质谱联用仪对活性物质进行了结构鉴定。得出以下结论:
1.飞廉乙醇提取物对黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl)、立枯丝核病菌(R.solani)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)具有抑制作用,EC50分别为1.46mg·ml-1、1.73mg·ml-1、1.59 mg·ml-1。
2.飞廉各提取物均对黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl)抑制最为敏感,确定黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl)为飞廉抑菌活性物质的检定菌。
3.飞廉抑菌活性物质最佳提取溶剂为乙醇。
4.飞廉茎叶部位提取物对黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl)的抑制率高于花和根部。飞廉抑菌活性物质最佳提取部位为6月份(花期)采集的飞廉茎叶部位。
5.飞廉抑菌活性物质最佳提取方法为快速溶剂萃取法。最佳提取工艺为:提取温度80℃、提取时间3min,提取次数3次,溶剂体积比40%。
6.采用试管法对飞廉乙醇提取物进行了成分预分析。飞廉乙醇提取物含有多种化学成分,其中含有挥发油、生物碱、甾醇类、糖及苷类、酚类、黄酮类。可能含有鞣质、内酯、蒽醌、香豆素等。
7.飞廉乙醇提取物抑菌活性受温度和pH值影响较大。温度大于80℃飞廉乙醇提取物抑菌活性明显下降;pH值为酸性或碱性时对黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl)的抑制率均明显降低;紫外光下连续照射60min和日光照射5天对提取物的抑菌活性无影响。
8.飞廉抑菌活性物质最佳萃取分离方案:将飞廉乙醇提取物浓缩成膏,伴以硅藻土,利用快速溶剂萃取进行萃取分离。先用极性小的溶剂正己烷去除叶绿素等小极性化合物杂质,然后用氯仿萃取抑菌活性物质。萃取温度50℃、萃取时间3min、萃取次数1次、溶剂体积比40%。
9.甾醇类化合物为飞廉中主要抑菌成分,0.2m·ml-1的甾醇类化合物对黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl)的抑制率是飞廉乙醇粗提物的4倍,EC50为0.68mg·ml-1。通过GC-MS检测分析,确定甾醇类化合物为菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇,含量分别为25.31%、29.15%、45.54%