肾缺血再灌注损伤(Renal ischemia reperfusion injury, RIRI)是急性肾动脉阻断或肾脏移植等临床治疗过程中常见的病理生理过程。它也是导致肾移植后功能恢复延迟或病人发生急性肾衰的的重要因素。当肾脏发生缺血再灌注时会产生大量的活性氧族(reac-tive oxygen species，ROS)，使肾脏处于高度氧化应激状态，这也是缺血再灌注损伤的重要机制之一。ROS的重要成员之一为H2O2，它可以通过破坏细胞内的蛋白质、DNA和脂类等生物大分子来影响细胞功能，进而引起细胞和组织死亡。　　 Peroxiredoxin(Prx)蛋白是近几年发现的一类过氧化物酶系，研究表明，它们具有清除ROS的作用。PrxV是其成员之一，它几乎在所有组织中均有表达，其中肾脏表达最高。线粒体和过氧化物酶体是细胞产生H2O2的两个主要部位，而PrxV在这两个部位均大量表达，因此推测:PrxV在清除H2O2中可能发挥了重要作用。过氧化氢酶（Catalases，CAT）主要存在于过氧化物酶体内，负责清除脂类代谢过程中产生的H2O2。当肾脏发生缺血再灌注损伤并处于高度氧化应激状态时，PrxV和CAT的mRNA水平如何改变，尚未见报道。　　 本研究通过采用无损伤动脉夹钳夹肾动脉法建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，然后观察肾内PrxV和CAT的mRNA水平变化，探讨其在清除H2O2中的作用，为肾缺血再灌注损伤的防治提供一条新思路。　　 目的:　　 观察PrxV和CAT在大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型肾内的mRNA表达变化，探讨其在肾内抗氧化应激反应中的作用。　　 方法:　　 1、肾脏缺血再灌注损伤模型的制备及取材；　　 雄性Wister大鼠12只，体重200±10 g，购于河北医科大学实验动物中心，随机分为对照组（Control）和肾脏缺血再灌注损伤组(RIRI)每组各6只。用6％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(5ml/kg)，参照余晓东等人的方法制备肾脏缺血再灌注损伤模型。RIRI组大鼠开腹后暴露其双侧肾脏，先切除右肾，然后钝性分离左肾动脉，在靠近肾门处用无创动脉夹夹闭左肾动脉，观察肾脏由鲜红色逐渐变为暗红色。45 mins后松开动脉夹，恢复血液供应，肉眼可见肾动脉充盈，肾脏由暗红色迅速变为鲜红色，表明再灌注成功。对照组大鼠开腹后只切除右肾，分离左肾动脉，但不夹闭左肾动脉。24小时后收集血液，3000rpm离心10min，分离血清用于血清肌酐(Serum Creatinine，SCr)、血尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）浓度测定;处死大鼠取肾，一部分置于液氮中用于CAT和PrxV的mRNA水平测定，一部分4％多聚甲醛中固定进行HE染色，观察肾组织形态学改变。　　 2、测定指标及方法：　　 2.1、HE染色观察大鼠肾脏的形态结构；　　 肾组织经常规脱水、透明，石蜡包埋后，切片厚约5μm，苏木精伊红染色，日本产Olympus光学显微镜下观察肾组织的形态学变化并进行图象分析。　　 2.2、血清SCr和BUN浓度测定；　　 血清SCr浓度采用苦味酸法测定;血清BUN浓度采用酶偶联速率法测定。　　 2.3、大鼠肾组织PrxV和CAT mRNA水平测定；　　 Trizol法提取肾组织总RNA。约3μg总RNA反转录成cDNA。以GAPDH为内参照，进行反转录聚合酶链反应(Reverse TranscriptionPolymemse Chain Reaction，RT-PCR)。分别以PrxV、CAT的扩增产物与GAPDH灰度值之比表示目的基因的mRNA相对表达量。　　 结果:　　 1、大鼠肾组织的形态学改变；　　 光学显微镜下可见正常组大鼠肾血管球、肾小囊、近曲、远曲小管及集合管形态结构清晰规整。而RIRI组大鼠可见肾血管球萎缩，体积变小;肾小囊腔扩张;肾小管管腔明显扩张，个别近曲小管上皮细胞水肿，胞浆疏松化;肾间质水肿，肾小管间隙扩大;集合管出现管腔扩张、上皮水肿等改变。　　 2、血清SCr和BUN的浓度；　　 与对照组相比，RIRI组血清中SCr和BUN的浓度均明显升高(P＜0.05)。　　 3、肾组织PrxV、CAT的mRNA相对表达量；　　 采用RT-PCR的方法测定大鼠肾组织内PrxV、CAT等抗氧化酶系的mRNA相对表达量。计算目的基因与内参照的比值得出其相对表达量并进行结果统计。分析表明:RIRI组大鼠肾组织PrxV、CAT的mRNA相对表达量均明显高于Con组(P＜0.05)。说明RIRI组大鼠肾组织内PrxV、CAT等抗氧化酶系表达升高。　　 结论:　　 1、切除右肾后在靠近肾门处用无创动脉夹夹闭左肾动脉可成功建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型。　　 2、血清SCr和BUN的浓度在大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型恢复血供24小时后已明显升高，提示此时肾功能已严重受损。　　 3、PrxV和CAT在大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型的基因表达水平均明显增强，提示它们在缺血再灌注损伤过程中发挥了抗氧化应激作用，对肾组织具有保护功能。