植物细胞镉离子与干旱胁迫下力学性能的动态监测

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近些年基于动物细胞力学提出了植物细胞力学的概念,但其检测和研究方法较动物细胞力学甚少。本文首次采用双谐振石英晶体微天平(QCM)与多次泛音Q-sense技术探测了不同浓度镉离子与干旱胁迫下水稻与烟草BY-2悬浮细胞所产生力与粘弹性变化,主要试验结果如下:1.培养了水稻与烟草愈伤组织与悬浮细胞。优化了水稻悬浮细胞与烟草BY-2细胞的原生质体提取方案。2.以1%的PDADMAC修饰金电极表面,使带正电荷的修饰表面与带负电的植物细胞互相吸附,达到芯片表面固定一层植物细胞的效果。3.采用5 MHz AT与BT切双谐振RQCM技术定量测定了水稻悬浮细胞和烟草BY-2细胞在不同浓度镉离子胁迫下施加给RQCM芯片上的力与粘弹性的动态变化规律。结果表明在加入近30000个细胞后,不同浓度Cd2+对水稻与烟草BY-2细胞的影响规律如下:在5-15μmol/L Cd2+浓度范围,细胞所产生的应力S增加,细胞粘弹性指数(CVI)也增加、细胞变硬;且S与CVI增加的程度随Cd2+浓度的增加而增。这里S为正值,因此随Cd2+浓度增加,细胞产生的膨胀力增大、细胞变得越硬。在20μmol/L Cd2+作用下,S与CVI均缓慢变小,即细胞的膨胀力减小、细胞变软。4.5-20重量百分比浓度(wt%)PEG6000模拟干旱胁迫烟草BY-2细胞的结果表明:在5-15 wt%PEG-6000浓度范围,随PEG-6000浓度的增加,S与CVI均先降低、而后再回升,即细胞的收缩力先增加而后再复原,细胞先变软再变硬;细胞收缩力增加与变软的程度随PEG6000浓度增加而增。当PEG6000浓度为20%时,细胞仅出现收缩力增加、变软的单调响应,但已丧失回复功能。此外,多次泛音Q-sense的测试结果表明随PEG6000胁迫浓度增高,不同探测深度下耗散、频率及细胞粘弹性指数的差异减小,在浓度为15%时,细胞受胁迫引起的QCM响应最大;在5-15%PEG6000浓度范围,细胞先变软再变硬、20%PEG6000胁迫下,细胞仅变软不再变硬。5.扣除细胞应力引起频移后计算的CVI,AT切与BT切差异明显减小,结果表明双谐振QCM能监测到细胞内部复杂的动态力的作用。Q-sense能测到不同倍频下CVI的差异。
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