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目的
建立病毒性心肌炎的体外模型,用新的化学方法提取到含量较高的广枣总黄酮,研究广枣总黄酮抗病毒的效果,明确病毒性心肌炎发病过程中是否存在细胞的凋亡,以及广枣总黄酮是否抑制心肌细胞的凋亡。
方法
化学法提取广枣总黄酮,高效液相法测定其含量。培养HeLa细胞和乳鼠心肌细胞,在HeLa细胞和心肌细胞水平上对柯萨奇B3病毒进行毒力滴定,并测定广枣总黄酮的药物毒性,建立体外病毒性心肌炎模型,通过细胞病变抑制实验,病毒繁殖抑制实验测定广枣总黄酮体外抗柯萨奇病毒能力。采用.AnnexinV-FITC/PI染色、Hoechst33258荧光单染观察染色质凝聚,观察病毒性心肌炎发病过程中心肌细胞是否存在凋亡,以及运用流式细胞仪检测广枣总黄酮是否抑制细胞凋亡。统计学方法采用T检验。
结果
成功建立体外病毒性心肌炎的模型,广枣总黄酮在HeLa细胞和乳鼠心肌细胞实验中可有效抑制柯萨奇B<,3>病毒引起的细胞病变数(P<0.05),对病毒繁殖有抑制作用(对数值升高一个以上),对细胞凋亡有抑制作用。
结论
成功建立体外细胞模型,通过体外实验证实提取的广枣总黄酮对心肌细胞有保护作用,通过凋亡相关实验证实病毒性心肌炎发病过程中有心肌细胞凋亡,且广枣总黄酮能抑制心肌细胞凋亡作用。