【摘 要】
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目的:从人乳腺癌细胞或组织中克隆乳腺癌新同源异形盒基因Bp1的公开读码框架(ORF)约长720bp,构建PMD18-T重组载体,为以后的进一步基因调控及早期诊断等实验研究奠定基础.方法
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目的:从人乳腺癌细胞或组织中克隆乳腺癌新同源异形盒基因Bp1的公开读码框架(ORF)约长720bp,构建PMD18-T重组载体,为以后的进一步基因调控及早期诊断等实验研究奠定基础.方法:1、培养人乳腺癌细胞株T47D、MCF7.2、从乳腺癌细胞和组织以及正常组织中提取RNA,然后逆转录成cDNA.3、设计引物,RT-PCR检测不同组织和细胞中Bp1 mRNA的表达.4、设计引物,用半巢式PCR方法从T47D细胞中扩增Bp1基因的公开读码框架(ORF).5、扩增产物连接入PMD18-T载体中构建重组质粒,连接产物转化DH5 α细菌,提取重组质粒用EcoRI酶切鉴定.6、克隆的序列测序验证.结果:1、验证Bp1基因在人乳腺癌细胞系T47D、MCF7及乳腺癌组织中异常表达.2、用巢式PCR方法,从乳腺癌T47D细胞中克隆出Bp1公开读码框架(ORF)720bp,并构建PMD18-T重组质粒,且测序证实.结论:1、Bp1基因在某些人乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中异常表达.2、克隆出Bp1基因的ORF,为今后的早期基因诊断和基因治疗打下基础.
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