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目的:鄂产开口箭(Tupistra chinensis Bak.)中化学成分,尤其是甾体皂苷的提取分离与结构鉴定,考察开口箭提取物的祛痰、抗炎、抑菌活性及其急性毒性,为开口箭的临床应用及本属植物的化学分类提供科学依据。
方法:常压、65 ℃,开口箭干燥根茎在多用强制渗漉罐中以甲醇提取,提取液经减压浓缩得浸膏,将此浸膏悬浮于水中,分别以氯仿、水饱和的正丁醇萃取。
GC-MS 联用分析法检测氯仿提取部分含有的脂溶性成分。正丁醇萃取部分分别经大孔吸附树脂柱层析、反相硅胶柱层析、反相C-18 高效液相色谱柱层析分离得到单体化合物,泡沫反应、Molish 反应和Liebermann-Burchard 反应结合红外光谱数据判断单体化合物的结构母核,元素分析和质谱数据确定分子量和分子式,综合分析单体化合物的红外光谱、质谱,尤其是各类超导核磁共振谱的数据,确定单体化合物的结构式。
采用小鼠气管段酚红排泌法评价提取物的祛痰活性,采用二甲苯诱发小鼠耳廓炎症评价提取物对抗急性炎症的作用,采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠迟发型超敏反应(DTH)评价提取物对DTH的影响,采用试管二倍稀释法评价提取物对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单孢等咽喉部常见致病菌的抑菌活性,采用孙氏改良寇氏法测定提取物的半数致死量LD50并评价其毒性大小。
结果:开口箭中分离得到一个甾体皂苷元(Ⅰ)和四个甾体皂苷(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ),经理化性质和波谱数据鉴定,其中两个化合物的结构确定为(20S,22R)-螺甾烯-1β,2β,3β,4β,5β,7α-六醇-酮(Ⅰ),为已知化合物;26-O- β-D-吡喃葡萄糖基-1 β,3 α,5 α,26-四羟基-5 β-呋甾-20(22)-烯-3-O- β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ),为一新化合物;甾体皂苷Ⅲ为强心苷,其具体结构尚在进行进一步的研究;甾体皂苷Ⅳ、Ⅴ 的结构有待进一步研究。计算机检索,参照NBS 图谱,GC-MS 联用仪检测出20种成分,主要成分为脂肪类化合物和甾体皂苷元。
开口箭具有显著的祛痰作用(P<0.01),对二甲苯诱发的小鼠耳廓炎症具有显著的抑制作用( P<0.01),但对DNCB所致小鼠DTH无明显作用( P>0.05),各提取物抗炎活性评价结果表明正丁醇部分(皂苷部分)抗炎活性较强( P<0.05),体外抑菌实验表明,开口箭对金黄色葡萄球菌(Staphulococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等有明显的抑菌作用,急性毒性实验表明,小鼠ig LD50 148.7 g?kg-1,毒性很小。
结论:从开口箭中分离得到五个甾体类化合物,鉴定了其中两个化合物的结构。
甾体皂苷元Ⅰ为已知化合物,甾体皂苷Ⅱ为一新化合物,甾体皂苷Ⅲ为强心苷,化合物Ⅳ和Ⅴ的结构尚需进一步研究。氯仿部分由GC-MS 联用仪检测出20 种成分,主要成分为脂肪类化合物和甾体皂苷元。药理实验显示开口箭毒性很小,具有显著的祛痰、抗炎及抑菌作用,有望开发为新一代临床有效的清咽利喉的药物。