犬副流感病毒（canine parainfluenza virus,CPIV）是犬传染性呼吸系统疾病（Canine Infectious Respiratory Disease,CIRD）的重要病原。CIRD俗称犬窝咳（kennel cough）,可使幼犬产生流涕、咳漱和发热等临床症状,严重时可致幼犬死亡。CPIV流行范围广,常与犬瘟热病毒等混合感染且临床表现相似,对犬呼吸系统造成严重损伤且难以鉴别诊断。本研究采用原核表达系统对CPIV NP蛋白进行体外表达,并对表达条件进行优化最终确定最佳表达条件为30℃,1 m M IPTG诱导10 h。通过GST亲和层析最终得到1.52 mg/m L的NP-GST融合蛋白2 m L,SDS-PAGE和western blot鉴定结果显示所得到的NP蛋白纯度高且具有较好的反应原性。采用纯化的NP-GST融合蛋白作为包被抗原建立CPIV NP抗体间接ELISA检测方法,并对各反应条件进行优化,最终确定最佳条件为:NP-GST融合蛋白包被浓度0.95μg/m L,CBS 4℃过夜包被,2%脱脂乳37℃封闭45 min,待检血清37℃孵育60 min,HRP酶标二抗5000倍稀释,37℃孵育30 min,显色15 min后测定OD630。所建方法阴、阳性判定标准为1.29,与犬细小病毒抗体阳性血清,犬呼吸道冠状病毒抗体阳性血清,狂犬病毒抗体阳性血清无交叉反应性,具有较好的特异性;CPIV抗血清稀释16000倍仍能检测出NP抗体的存在,具有较好的灵敏性;批内重复试验变异系数和批间重复试验变异系数均小于10%,具有较好的重复性;与CPIV抗体检测的间接免疫荧光（IFA）检测方法相比具有很好的符合率,且比IFA灵敏度更高。应用所建立的CPIV NP抗体间接ELISA检测方法对武汉地区犬群进行了CPIV血清学调查,初步了解了CPIV在武汉地区的流行情况和CPIV的免疫情况,掌握了武汉地区CPIV的血清学资料。同时应用杆状病毒表达系统对CPIV HN蛋白胞外域进行了表达尝试。研究发现在sf9昆虫细胞中难以独立表达HN蛋白胞外域,仍需对试验设计和表达条件进行进一步研究,这为CPIV HN蛋白的真核表达摸索了条件。