储烟仓库中苏云金芽孢杆菌资源及新菌株LY-99的特性研究

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储烟仓库环境富含苏云金芽孢杆菌,且组成上不同于土壤环境,苏云金芽孢杆菌的检出率较高,是许多特异性苏云金芽孢杆菌资源的积聚场所。目前,国内外有关在储烟仓库中分离苏云金芽孢杆菌菌株的研究较少。本文以全国6个不同省份的8个主要卷烟厂为代表,考察了我国储烟仓库中苏云金芽孢杆菌资源分布情况,并对所分离到的苏云金芽孢杆菌新菌株LY-99进行了分子特性研究。 1.储烟仓库中苏云金芽孢杆菌的分离和筛选 本文通过醋酸钠抑制筛选法对采集于全国8个主要卷烟厂(襄樊卷烟厂、武汉卷烟厂、龙岩卷烟厂、厦门卷烟厂,延吉卷烟厂、杭州卷烟厂、昆明卷烟厂和广州卷烟厂)储烟仓库中的578份不同类型的样品进行了苏云金芽孢杆菌的分离和筛选。结果表明,烟叶储藏仓库中苏云金芽孢杆菌资源极为丰富,在其中的238份样品中分离出苏云金芽孢杆菌972株,检出率高达41.18%;不同卷烟厂中苏云金芽孢杆菌的检出率不同,延吉卷烟厂的检出率最高(100%),其次是龙岩卷烟厂(96.15%)、昆明卷烟厂(79.37%)、襄樊卷烟厂(78.95%)、厦门卷烟厂(61.11%)、杭州卷烟厂(29%)、广州卷烟厂(22.81%)和武汉卷烟厂(15.27%)。不同类型的样品的检出率和所分离出的菌株数也存在较大的差别,其中粉尘样品所含苏云金芽孢杆菌资源最为丰富,依次是烟叶碎屑、烟叶和死虫。 2.新菌株LY-99的分子特性研究 初步考察了储烟仓库中苏云金芽孢杆菌分离株对鳞翅目昆虫小菜蛾、甜菜夜蛾、烟草粉螟以及双翅目昆虫韭蛆的生物活性。初步明确了储烟仓库中苏云金芽孢杆菌对供试昆虫的活性差异,并筛选出对小菜蛾、甜菜夜蛾及烟草粉螟具有较高生物活性,同时对双翅目害虫韭蛆也有一定的生物活性的分离株LY-99,为今后商品化开发提供了基础。菌株LY-99的遗传多样性分析结果表明,分离于烟叶储藏仓库中的LY-99是一株新的阿莱亚种菌株(alesti,H3a3c)。以阿莱亚种标准菌株作为对照,进行质粒图潜分析、SDS-PAGE分析、基因型鉴定、PCR-RFLP分析、序列分析以及生物活性测定等。结果表明分离株LY-99虽然和对照菌株具有相同的血清型,但两
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