【摘 要】
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[目的]检测新型雌激素受体GPER1在肺癌细胞中的表达;并进一步探讨GPER1对EGFR-TKIs耐药的肺癌细胞的增殖作用。[方法]运用Q-PCR方法比较GPER1和ERβ在肺癌细胞A549、PC-9和乳
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[目的]检测新型雌激素受体GPER1在肺癌细胞中的表达;并进一步探讨GPER1对EGFR-TKIs耐药的肺癌细胞的增殖作用。[方法]运用Q-PCR方法比较GPER1和ERβ在肺癌细胞A549、PC-9和乳腺癌细胞MCF-7(阳性对照)中的表达,并构建对TKIs耐药的肺癌PC9-GR、PC9-OR细胞株,使用PCR及ddPCR法检测构建的耐药细胞株中EGFR突变情况。应用免疫荧光技术检测GPER1在PC9、PC9-GR及PC9-OR细胞中表达位置的变化。为深入探讨新型雌激素受体GPER1在耐药过程中的作用,本研究还通过蛋白质印迹法(western blot)检测了 E2、G1对GPER1在肺癌细胞A549、PC9-OR中表达的影响;运用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测了雌激素受体GPER1对肺癌细胞A549、PC9-OR增殖的影响。[结果]1.Q-PCR法检测到在mRNA水平,GPER1和ERβ在A549细胞中的表达明显高于PC-9细胞,且表达水平接近MCF-7细胞。2.PCR和ddPCR测序法对肺癌细胞株PC9、PC9-GR、PC9-OR进行了检测,发现PC9没有发生T790M突变,PC9-GR发生了 T790M突变,而PC9-OR细胞株中T790M突变再次消失。3.免疫荧光检测到GPER1在PC9、PC9-GR细胞中主要表达在细胞核中,而在PC9-OR中主要表达在细胞核和细胞质中。4.蛋白质印迹法测定发现E2、G1促进了 A549、PC9-OR细胞株中的GPER1表达。5.细胞计数试剂盒-8检测到GPER1介导了 E2及G1对A549和PC9-OR细胞的增殖作用。[结论]1.新型雌激素受体GPER1在肺癌细胞中表达。2.E2及G1促进了肺癌细胞A549和PC9-OR中的GPER1表达。3.新型雌激素受体GPER1介导E2及G1促进了 EGFR-TKIs耐药的肺癌细胞增殖。
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