木糖渣酶解及乙醇发酵的研究

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利用生物技术将废弃纤维原料制取燃料乙醇,具有重要的社会意义和经济利益。本文以水洗木糖渣为纤维原料,以驯化的耐乙醇酿酒酵母TSH-3-G11为供试菌株,对纤维素酶水解工艺,菌种驯化以及SSF纤维素生产乙醇等方面进行了研究。实验通过对玉米芯,木糖渣,糠醛渣等几种纤维原料进行成分分析,确定木糖渣经水洗处理,可作为纤维素酶解的实验材料。实验对水洗木糖渣的纤维素酶水解工艺进行研究,最佳条件为:纤维素酶用量11 FPU/g(酶活/底物),温度50℃,pH为5.0,底物与缓冲液的最适比例为1:8,间歇振荡下,转速为140 rpm;酶水解作用时间为48h。在此参数条件下,纤维素转化率最高达到62%。实验研究了颗粒度大小,添加玻璃珠及微波辐照对底物水解的影响。结果表明,粉碎颗粒度为0.125mm(120目)的木糖渣酶解效率最高为47%。添加玻璃珠提高了酶解效率,但是不利于设备重复利用。经微波辐照的木糖渣比未经辐照的水解效率提高了13%。添加纤维二糖酶提高了纤维素转化为葡萄糖的效率,但对纤维素总转化率提高不大。添加纤维素酶激活剂,金属离子磷酸氢二钠,磷酸钙,乙酸铵对纤维素酶水解有促进作用,非离子表面活性剂tween和PEG(聚乙二醇)能显著提高酶解效率,水解液中添加tween20和tween60在1%(v/v),tween40在1.5%(v/v),tween80在0.5%(v/v)时,PEG2000在1.5%,PEG4000和PEG8000在3%时,各自达到最高酶解效率。通过驯化的手段对酿酒酵母TSH-2,TSH-3进行耐乙醇驯化,经过13次传代培养得到的TSH-3-G11,从耐8%乙醇提高到了14%,当底物浓度大于25%时,驯化菌株的乙醇产率高于原始菌,与原始菌比较,乙醇产率提高了9.6%。以驯化菌种TSH-3-G11进行木糖渣-乙醇发酵,结果表明,摇瓶模拟发酵时,乙醇产量SSF要高于SHF。在5L发酵罐以间歇搅拌的方式进行SSF乙醇发酵中,90h内乙醇的最终浓度为2.25%(v/v)。
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