【摘 要】
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以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）JF-20菌为出发菌株，对原生质体制备及再生的各种影响因素进行了研究。在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体，结果发现，JF-20菌的原生质体形成率及再生率分别达到86.9％和38.4％。并通过光学显微镜技术，观察了原生质体形成及再生的有关现象。 以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniform
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以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）JF-20菌为出发菌株，对原生质体制备及再生的各种影响因素进行了研究。在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体，结果发现，JF-20菌的原生质体形成率及再生率分别达到86.9％和38.4％。并通过光学显微镜技术，观察了原生质体形成及再生的有关现象。 以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）JF-20菌为出发菌株，在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体，并对其进行复合诱变处理，从大量突变株中筛选到一株稳定，具有较高产量的碱性蛋白酶产生菌JF-UN122，其酶活由出发菌株的894.4U／mL提高到8129.4U／mL。经过单因素及正交实验优化发酵培养基，结果发现该诱变株的最适产酶条件为：糊精6.0％，黄豆粉3.0％，KH2PO4 0.3％，Na2HPO4 0.04％，Na2CO30.08％，pH 8.5。 从地衣芽孢杆菌JF-UN122的发酵液，经硫酸铵分段盐析得粗酶，再由DEAE-Sephadex-A-50吸附色素，CM-Sephadex-C-50离子交换及Sephadex-G-75分子筛柱层析等步骤获得电泳纯的碱性蛋白酶样品。SDS-PAGE测得其分子量为31.6KDa。以酪蛋白为底物时，Km值为5.26ug／mL，Vm值为20.8ug／min。该酶的最适pH为9.0，最适温度为55℃。该酶在pH 5-11，55℃以下均较稳定，对1mol／LH2o2具有一定的耐氧化性。PMSF对酶有抑制作用，二硫苏糖醇（DTT）对酶有保护作用，而钙离子、EDTA、SDS、尿素等对酶活力无明显影响。
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