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目的:本研究利用异种骨制备的脱细胞脱钙骨组织工程复合多孔支架,将传代培养的Sox-9基因修饰后SD大鼠骨髓间充质干细胞种植于其中,并在Balb/c裸鼠皮下进行移植,检测细胞支架复合物的理化性能和生物相容性,探讨其成为组织工程椎间盘的可行性,为椎间盘组织工程的研究提供实验依据。方法:(1)复苏Sox-9基因修饰的SD大鼠骨髓间充质干细胞,采用常规办法对其进行传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态。同时将已经制作成型的骨支架消毒,放入无菌的24孔板中,将已经进行过脱壁处理的基因修饰骨髓间充质干细胞接种于支架上,体外培养48小时,倒置显微镜、扫描电镜、组织学染色观察细胞在支架上的粘附情况。(2)细胞支架复合物体外培养2天后,分实验侧和对照侧将其植入Balb/c裸鼠背部皮下。体内培养2月后,肉眼观察裸鼠背部植入部位情况;处死裸鼠,取出细胞支架复合物,行冰冻切片,扫描电镜、组织学染色观察细胞在支架上的生长情况,行II型胶原免疫组化染色,qRT-PCR技术检测支架中骨髓间充质干细胞的Sox-9基因、II型胶原表达水平。结果:(1)镜下Sox-9基因修饰SD大鼠骨髓间充质干细胞呈长梭形,在第3代开始出现衰老的形态表现;细胞接种支架后,倒置相差显微镜下、扫描电镜、HE染色观察骨髓间充质干细胞在支架上粘附良好。(2)细胞支架复合物体内培养2月后,肉眼观察在裸鼠皮下植入部位周围无感染及炎症反应,细胞支架复合物呈楔形,与皮肤内面愈合,II型胶原免疫组化染色阳性,qRT-PCR检测实验侧支架复合物中骨髓间充质干细胞的Sox-9基因、II型胶原表达水平比对照侧高。P<0.01,△P>0.05,有统计学意义。结论:(1)使用静态接种技术构建骨支架材料与基因转染BMSCs的复合体,可以实现细胞黏附于骨支架并在骨支架内增殖;(2)体外构建的细胞支架复合物在裸鼠皮下培养的方法得到的产物,经检测证实细胞仍能够稳定表达Sox-9目的基因和II型胶原,支架材料仍大部分存在,产物较体外培养更接近类软骨组织。