桑黄多糖的提取及其对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用研究

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桑黄是桑属植物上着生的大型真菌,在隋唐年间中医著作中已被作为药物收录。在现代发现其提取物具有良好的抗肿瘤作用后,更是受到广泛的关注。体外实验及动物实验表明,桑黄多糖具有抗癌、免疫调节、护肝、抗氧化、降血糖等多种药理活性。酒精中毒在西方国家占各种肝病病因的首位,在亚洲为仅次于病毒性肝炎的第二位肝病病因。在全世界范围内有大量的患者受到酒精肝病的困扰,而目前尚未有切实有效的酒精肝病治疗药物。目的:使用小鼠急性酒精肝损伤模型来研究桑黄多糖对酒精致肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机理。方法:分别采用热水法和酶法提取野生桑黄子实体中的多糖。检测所得多糖样品中总糖、还原糖和蛋白的含量。选择纯度较高的多糖样品进行活性研究。将小鼠随机分为5组:空白对照组、酒精损伤模型组、桑黄多糖低剂量组、桑黄多糖中剂量组和桑黄多糖高剂量组。桑黄治疗组灌胃对应剂量的桑黄多糖溶液,两小时后除空白组外灌胃酒精溶液。观察记录小鼠的行为改变。12 h后、24 h后各重复灌胃一次,共三次。末次灌胃后8小时,采血、取肝脏。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和肝脏组织匀浆中甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA),还原型谷胱甘肽(GSH)水平。制作肝脏光镜石蜡切片和电镜超薄切片,观察对比各组小鼠肝脏组织病理学差异和超微结构的改变。结果:1.热水法提取所得桑黄多糖较酶法提取所得多糖纯度高。2.酒精损伤模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、肝组织甘油三酯和丙二醛水平显著(P<0.05)升高,肝组织中还原型谷胱甘肽水平显著(P<0.05)降低,并伴随肝细胞死亡和线粒体严重变性。3.桑黄多糖高剂量组小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶、肝组织中甘油三酯和丙二醛水平显著(P<0.05)低于酒精损伤模型组,肝组织还原型谷胱甘肽显水平著(P<0.05)高于酒精损伤模型组,且肝细胞死亡数目明显减少,线粒体形态接近正常。结论:1.热水法提取桑黄多糖方法成熟,所得样品纯度较高,适于进行小鼠急性酒精肝损伤保护作用研究。2. 5 g/kg酒精连续灌胃三次,可造成小鼠急性酒精肝损伤,并伴随明显的肝氧化应激。3.桑黄多糖高剂量(1.0 g/kg)对急性酒精肝损伤有保护作用。4.桑黄多糖对酒精肝损伤的保护作用,可能源于桑黄多糖缓解了酒精摄入造成的氧化应激,并且减少了氧化应激引起的免疫损伤。
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