目的:线粒体是大多数哺乳动物细胞中腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine triphosphate,ATP）的主要提供者,线粒体功能紊乱将导致细胞生理发生改变,包括线粒体的形态变化——裂变和融合,线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）下降、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）增加,从而导致细胞凋亡。热休克蛋白（Heat Shock Proteins,HSPs）是机体细胞中一组急性时相反应蛋白,在不同的生理过程中发挥作用,以帮助维持细胞内环境的稳定。其中,热休克蛋白70家族（HSP70s）可辅助细胞内肽段的折叠,避免其形成错误结构,并保护细胞免受错误折叠蛋白质聚集所带来的损伤。热休克蛋白40家族（DnaJ/HSP40s）最基本的生物学功能是辅助HSP70s,协助HSP70s的ATP水解酶活性,发挥辅助分子伴侣功能。我们医院的皮肤科门诊应用局部热疗（44℃,30分钟）来治疗寻常疣及尖锐湿疣患者,并且发现该方法比传统疗法更有效。团队前期研究中已证实,温热后HaCaT细胞DnaJA4表达增高,温热可以诱导HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖,促进细胞因子表达,促进抗病毒活性。DnaJA4基因缺失会促进HaCaT细胞凋亡,并且在温热刺激条件下增强这种反应。经质谱分析发现温热治疗后,DnaJA4与线粒体、能量代谢相关蛋白相互作用。因此,本研究旨在通过温热干预野生型（Wild type,WT）HaCaT细胞和DnaJA4基因敲除（Knock out,KO）型HaCaT细胞,观察HaCaT细胞内线粒体形态及功能的变化,探讨温热疗法治疗病毒感染性皮肤疾病的作用机制。研究方法:1、研究对象:培养WT型和DnaJA4-KO型HaCaT细胞,37℃为未温热组,44℃温热干预30分钟为温热组,温热处理前24小时于培养基中加入20μM线粒体膜电位抑制剂羰基氰化物间氯苯腙（Carbonyl cyanide3-chlorophenylhydrazone,CCCP）为阳性对照组,两种类型的细胞分别于37℃或温热后4小时进行检测。2、线粒体形态观察:利用线粒体特异性荧光探针AIETMMitochondria Red对细胞线粒体进行染色,应用共聚焦显微镜观察温热前后WT型和DnaJA4-KO型HaCaT细胞的线粒体形态差异。3、流式细胞术（Flow cytometry,FCM）:检测线粒体膜电位、ROS的水平及细胞凋亡的比例在WT型HaCaT细胞和DnaJA4-KO型HaCaT细胞中的差异。结果:1、线粒体形态观察:37℃条件下,WT型HaCaT细胞线粒体围绕细胞核呈放射状分布,而DnaJA4-KO型细胞的线粒体呈现核周积聚状态,线粒体围绕细胞核偏向一侧分布;在44℃温热作用下,WT型HaCaT细胞的线粒体发生核周聚集,DnaJA4-KO型细胞线粒体形态未见明显变化。2、流式细胞实验:（1）与未温热组（37℃）相比,温热（44℃）刺激后,WT型和DnaJA4-KO型HaCaT细胞线粒体膜电位均下降,差异具有统计学意义（WT型:P<0.01,DnaJA4-KO型:P<0.001）;温热刺激后,与WT型相比,DnaJA4-KO型HaCaT细胞线粒体膜电位下降更明显（P<0.001）。（2）与未温热组（37℃）相比,温热（44℃）刺激后线粒体ROS表达均上升（WT型:P<0.001,DnaJA4-KO型:P<0.001）;温热刺激后,与WT型相比,DnaJA4-KO型HaCaT细胞线粒体ROS水平上升更显著（P<0.05）。（3）与未温热组（37℃）相比,温热（44℃）刺激后细胞凋亡比例均增加（WT型:P<0.001,DnaJA4-KO型:P<0.001）;温热刺激后,与WT型相比,DnaJA4-KO型HaCaT细胞凋亡比例增加更明显（P<0.01）。结论:温热及DnaJA4-KO影响HaCaT细胞线粒体的形态,使线粒体发生核周聚集。温热刺激可使线粒体膜电位下降、活性氧水平上升,发生线粒体功能损伤或障碍导致的细胞凋亡,而DnaJA4可能减轻了温热刺激对线粒体造成的损伤。