磁靶向自供氧纳米粒子介导的抗菌光动力疗法对牙周菌斑生物膜的影响

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牙周炎是一种由菌斑聚集引起的炎症性疾病,如不加以控制会造成牙龈附着丧失,牙周袋形成,牙槽骨吸收,最终导致牙齿松动,甚至脱落。目前临床治疗牙周炎主要是通过机械方法进行表面清创。然而,牙周袋的局部因素,如深而窄的牙周袋,根分叉往往难以彻底清除细菌,多数情况下需要配合抗生素减少致病菌及毒素,以提高治疗效果。但是,随着细菌耐药性的出现,抗生素的应用受到了限制。因此,寻找一种更为安全有效的同时实现抑菌杀菌的疗法是非常必要的。近年来,应用抗菌光动力疗法(antimicrobial photodynamic therapy,aPDT)治疗牙周炎,不仅抑制了菌斑生长,而且避免了耐药菌株的产生,具有易操作、抗菌谱广、效率高的优点。虽然商品化的光敏剂已得到广泛的应用,但是仍存在一些亟待解决的问题:(1)光敏剂表面极性导致其生物利用率低;(2)由于牙周袋结构复杂,同时受龈沟液,唾液冲刷等影响,病损区光敏剂的浓度无法得到保障;(3)aPDT治疗是一个必须有氧参与的过程,而牙周炎形成的牙周袋是一个低氧环境,这就造成光敏剂介导的aPDT治疗牙周炎的效果受到影响。综上所述,如何提高病损区光敏剂有效浓度,如何促使aPDT在低氧环境下效果不受影响,对提高aPDT治疗牙周炎具有重要意义。本研究设计合成磁靶向自供氧纳米粒子,旨在研究其增强抗菌光动力疗法对牙周菌斑生物膜的影响,改善牙周微环境,为临床牙周炎的治疗提供新思路。在第二章中,首先通过两亲性硅烷作为载体,负载磁性Fe3O4,光敏剂二氢卟吩e6(Chlorin e6,Ce6)及香豆素6(Coumarin 6,C6),合成磁靶向多功能纳米粒子(Fe3O4-silane@Ce6/C6 NPs)。然后,对纳米粒子进行性能的表征,生物安全性的评价,抗菌性能的评价和实时监测功能与磁靶向功能的评价。结果证明:该纳米粒子具有良好的水溶性、化学稳定性和生物安全性;对血链球菌(Streptococcus sanguinis,S.sanguinis)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum)三种牙周相关细菌均具有较强的抗菌作用;同时具有实时监测功能和磁性靶向的能力。在第三章中,对Fe3O4-silane@Ce6/C6 NPs进行改良,通过氧化还原沉淀反应在其表面吸附MnO2,成功合成磁靶向自供氧纳米粒子(Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs)。对纳米粒子进行理化性能的表征和实时监测功能与磁靶向性能的评价。结果证明:MnO2成功吸附于纳米粒子表面,并且该纳米粒子具有较强的氧化性;MnO2的吸附不影响纳米粒子的实时监测功能和磁性靶向功能。在第四章,对Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs体外抗菌性能进行评价。结果证明:Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs具有良好的生物安全性;Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs能够显著增强aPDT对戈登氏链球菌(Streptococcus gordonii,S.gordonii),P.gingivalis,F.nucleatum三种牙周相关细菌的单菌种生物膜和多菌种生物膜的抗菌作用;Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs能够通过抑制FimA-Ⅱ型基因(Fim A-Ⅱ型)和FimA-Ⅳ型基因(Fim A-Ⅳ型)、精氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶基因(RgpA,RgpB)、赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶基因(Kgp)的表达,可以阻碍细菌定植,干预细菌与宿主之间的相互作用,增强aPDT效应,在治疗牙周炎方面具有巨大潜力。在第五章中,首先,建立大鼠牙周炎症模型,然后探究基于Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs的aPDT对大鼠牙周炎症模型的影响。结果显示Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs介导的aPDT能够显著减轻牙龈炎症;Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs介导的aPDT组三种炎症因子阳性细胞率显著降低;Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs介导的aPDT组IL-1β,IL-6两种促炎因子基因表达显著下降,IL-10和Arg-1两种抑炎因子基因表达显著增加;同时Fe3O4-silane@Ce6/C6@MnO2 NPs注射60天后,大鼠重要脏器未见损伤及炎症反应。综上所述,本研究利用两亲性硅烷作为载体,负载磁性Fe3O4,光敏剂Ce6及C6,提高Ce6的亲水性以增加其生物利用率,同时使纳米粒子具有磁靶向性能和实时监测Ce6药物浓度性能,最后在纳米粒子表面吸附MnO2,利用MnO2与H2O2产生O2的特性,改善牙周低氧微环境,能够有效增强aPDT对牙周菌斑生物膜的抗菌效果,有效治疗大鼠牙周炎症,且具有较好的生物安全性。这种新型纳米粒子的合成为临床牙周炎的治疗提供了新思路,为磁靶向自供氧纳米粒子的临床应用提供了理论基础和实验支撑。
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