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生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF9)是调控动物卵泡发育及排卵效率的生长因子之一,因此,GDF9基因被认为是调控动物繁殖率的重要基因之一。由于绝大多数绵羊品种是季节性发情的单胎家畜,因而提高其产羔率是养羊业一直追求的生产目标。本研究首先以小尾寒羊为对象,通过对2月龄(性成熟前)、6月龄(性成熟)和12月龄(性成熟后)等不同年龄段的卵巢、输卵管、子宫内膜上转录水平和蛋白水平表达的研究,以阐明其对雌性绵羊生殖器官发育的调控作用。然后再采用PCR-SSCP法对GDF9基因在双羔型和单羔型乾华肉用美利奴羊的SNP检测,目的是验证该基因与绵羊产羔性状的关联及GDF9基因作为绵羊产羔性状候选基因的可能性。通过上述研究,获得如下研究结果:1.利用免疫组化法,对GDF9蛋白在不同年龄雌性小尾寒羊的卵巢、输卵管和子宫内膜等主要生殖器官进行蛋白定位的研究。结果表明,GDF9蛋白在2月龄、6月龄和12月龄3个不同年龄段的子宫内膜、输卵管、卵巢上均能表达。2.利用RT-PCR法,检测GDF9基因在3个不同年龄雌性小尾寒羊的卵巢、输卵管和子宫内膜3个生殖器官中的mRNA表达水平及差异性。研究结果表明,3个年龄段的各个生殖器官均有GDF9基因mRNA表达,并且还具有器官间及年龄间的差异性。(1)GDF9基因mRNA表达量在2月龄雌性小尾寒羊的卵巢、输卵管和子宫内膜间具有极显著的差异性(P<0.01);6月龄雌性小尾寒羊GDF9基因mRNA表达量在子宫内膜与输卵管间无显著差异(P>0.05),子宫内膜与卵巢间差异显著(P<0.05),输卵管与卵巢间的表达量则具有极显著差异(P<0.01);GDF9基因mRNA表达量在12月龄的小尾寒羊子宫与输卵管间、子宫与卵巢间均无显著差异(P>0.05),但输卵管与卵巢间则具有极显著差异(P<0.01)。(2)GDF9基因mRNA在子宫内膜的表达量,2月龄与6月龄间无显著差异(P>0.05),但2月龄与12月龄间、6月龄与12月龄间均有显著差异(P<0.05);GDF9基因mRNA在输卵管的表达量,其表达差异在3个年龄间均不显著(P>0.05);GDF9基因mRNA在卵巢上的表达量,2月龄与6月龄间、2月龄与12月龄间均表现出极显著的差异性(P<0.01),而6月龄与12月龄则无显著性差异(P>0.05)。3.利用PCR-SSCP方法,分别对单羔型、双羔型乾华肉用美利奴羊母羊及多胎型小尾寒羊母羊的GDF9基因的单核苷酸多态性进行检测。结果表明:在3个检测群体中均检测到了AA、AB 2种基因型,A等位基因频率分别为0.7、0.9、0.925,B等位基因频率分别为0.3、0.1、0.075。测序结果表明,AB型在外显子1的260bp处发生了G→A的单碱基突变。通过对基因型分布差异结果分析发现,单羔型乾华肉用美利奴羊母羊突变率显著地高于同品种的双羔型(P<0.05);单羔型乾华肉用美利奴羊母羊突变率极显著地高于多胎型小尾寒羊母羊(P<0.01);双羔型乾华肉用美利奴羊母羊突变率与多胎型小尾寒羊母羊间没有明显差异(P>0.05),说明GDF9基因可以作为绵羊产羔性状的候选基因。