论文部分内容阅读
[目的]淋巴瘤在我国是比较常见的恶性肿瘤之一,近几年来它的发病率呈上升趋势,尽管临床经过一系列的治疗可以获得一定的成效,但依然存在难治和复发的病例。淋巴瘤的预后不良,所以分子靶向治疗的研究极其重要。超保守RNA是一种新的长链非编码RNA,近几年来许多人研究证明超保守RNA在多种肿瘤的发生、转移、侵袭以及预后有着相当密切的关系。本课题主要研究uc.133在小鼠和人的B细胞淋巴瘤与其正常相关组织中的表达情况,并研究uc.133在B细胞淋巴瘤发生发展中的作用及机制。[方法]1.采取 4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,4-OHT)分别激活 p53 0min、1Omin、15min、30min的小鼠的肿瘤组织,分别用qRT-PCR验证前期基因芯片筛选出的4个UCRs的表达水平。并对其在小鼠B细胞淋巴瘤与小鼠正常骨髓B细胞中的表达情况进行比较,筛选差异性表达比较明显的UCR。2.构建差异性表达比较明显的uc.133的逆转录病毒表达质粒及MSCV空载体表达质粒,然后分别感染小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞株,人B细胞淋巴瘤Romas细胞株,嘌呤霉素筛选后使细胞感染率达90%以上,使uc.133在小鼠和人的B细胞淋巴瘤细胞株中过表达。3.体外检测38B9细胞与Romas细胞过表达uc.133后的增殖及凋亡情况;体内将过表达uc.133的细胞注射至BALB/c小鼠和裸鼠皮下,观察肿瘤的生长情况,一般两周左右取出小鼠肿瘤组织做Western Blot检测uc.133基因序列所在的宿主基因RSRC1蛋白的表达及病理实验。[结果]1.qRT-PCR 检测显示 uc.133、uc.268、uc.316A、uc.95 在 p53 激活 Omin、1Omin、15min、30min后的表达水平上调,而其在小鼠B细胞淋巴瘤与小鼠正常骨髓B细胞中的比较,表达具有差异性(p<0.05),其中uc.133下调最明显;2.将差异性最明显的uc.133质粒及MSCV空载体转染293T细胞包装得到病毒,然后病毒分别感染38B9细胞和Romas细胞,嘌呤霉素筛选后使细胞感染率达96%。3.体外检测38B9细胞和Romas细胞过表达uc.133后与对照组比较,细胞增殖缓慢,凋亡增多。体内检测到38B9细胞过表达uc.133后肿瘤组织与对照组比较明显变小,而Romas细胞过表达uc.133后未形成肿瘤。Western Blot检测到38B9细胞与Romas细胞过表达uc.133后RSRC1的表达减少。[结论]uc.133在小鼠B细胞淋巴瘤发生发展中起着抑癌作用。