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抗菌肽是生物体天然免疫系统的重要组成部分。它们是一类对细菌、真菌、病毒以及肿瘤细胞表现出良好的抑制作用的小分子多肽,是新型抗生素开发的良好候选资源。本课题采用NCCLS推荐的M27-A2方案,以临床对氟康唑耐药的白念珠菌作受试菌株,通过微量液基稀释法对31条动物抗菌肽进行体外抗耐药真菌活性测定,结果显示其中仅抗菌肽RL4和MAP28对受试耐药菌株都表现出明显且稳定的抑菌活性(MICso分别为12.2μM,9.4μM),其余抗菌肽活性较弱(MIC8o值范围为20.2-57.1μM)或是未表现出抑菌活性。当通过棋盘式微量液基稀释法,将31条抗菌肽与氟康唑联合进行抗耐药白念珠菌活性测定时,发现仅RL7、LR5、LR7与氟康唑合用对一株耐药白念珠菌显示出一定的协同作用(FICI<0.5),其余抗菌肽与氟康唑合用表现为相加或无关。基于抗菌肽RL4和MAP28对氟康唑耐药菌具有良好的抗菌活性,本课题全面考察了RL4和MAP28对真菌的抗菌作用并对其作用机制进行了初步探讨,为抗真菌耐药研究提供新思路。首先,微量液基稀释法测定结果表明抗菌肽RL4和MAP28对多种真菌均具有良好的抗真菌活性,MIC80值的范围分别为6.1-48.8μM和2.32-18.8μM,尤其对一些唑类耐药菌,RL4和MAP28的抗菌活性都比氟康唑高。琼脂平板纸片扩散实验证实了RL4和MAP28的抗菌活性。最低杀菌浓度的测定和时间杀菌曲线实验发现一定浓度下RL4和MAP28都表现出杀菌作用。多肽作用后胞内PI(Propidium Iodide)荧光强度的测定证实了RL4和MAP28在短时间内可发挥抗真菌的作用。同时菌丝生长实验证实RL4和MAP28对耐药菌菌丝的形成具有抑制作用。本课题进一步通过对氟康唑耐药白念珠菌细胞膜通透性改变和氧化损伤作用等方面的分析,考察了RL4和MAP28抗白念珠菌的作用机制。研究结果表明：RL4对胞内钾离子的外排没有显著性影响,但会引起耐药菌胞内生物大分子的外泄,并能快速改变细胞膜的通透性,促进PI进入胞内,发挥抗真菌作用。电镜观察结果可见,RL4作用后细胞膜皱缩,部分真菌的细胞壁和细胞膜形成明显的裂口。而MAP28可迅速促进胞内钾离子外排,同时可快速引起胞内生物大分子的外泄,引起膜通透性改变,发挥抗菌作用；电镜观察结果可见细胞膜破坏严重,且胞内FITC标记MAP28的绿色荧光可时间依赖性增强。此外MAP28能够剂量依赖性的升高白念珠菌内源性活性氧水平,降低线粒体膜电位；且低浓度MAP28能够促进真菌细胞凋亡,高浓度MAP28直接杀死细胞。综上所述,RL4和MAP28具有显著的抗真菌活性,都通过快速影响细胞的功能来发挥作用。研究结果提示这两条抗菌肽具有开发成为新型抗真菌药的前景,但是其抗真菌活性有待动物体内实验的进一步验证。