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自2010年以来,仔猪病毒性腹泻病在我国多个省份不断大规模暴发,常以发病快、传播迅速、高发病率和死亡率为特点,并且对产房仔猪危害最大。为了解江苏地区病毒所致猪腹泻病的情况,本研究通过RT-PCR方法对2015年至2016年江苏省4个地级市5个规模化猪场的166份送检临床样品分别进行了 PEDV-N和PDCoV-S1的检测,并对部分阳性基因进行测序比较。结果显示,PEDV阳性率为8.43%;PDCoV阳性率为19.88%。但两种病原在5个猪场中均没有发生混合感染。PEDV-N基因序列分析表明,本研究分离所得的5个序列均未出现基因的插入和缺失,只在在个别位置呈现出点突变,说明PEDV-N基因在流行传播过程中相对较为保守。N基因遗传进化分析显示,涟水猪场和隆康猪场检测到的PEDV-N序列均与中国毒株 CH-HNLH-2015、CH-HNAY-2015、CH-GDQY-3-2011、CH-SDRZ-2-2011 和CH-BJYQ-2-2011序列在同一分支,亲缘关系比较相近,与经典毒株CV777亲缘关系较远。隆康猪场毒株CHJS/XH-LK10/2015、CHJS/XH-LK37/2015与美国毒株USA-Texas128-2013、USA-KS-2013、USA-Minnesotal88-2014、USA-Kansas125-2014等亲缘关系较近,表明此次感染的发生可能与国内毒株的流行以及近年美国PEDV的爆发有关。PDCoV-S1基因序列核苷酸同源性分析显示,本研究分离所得的6个PDCoV-Sl序列均未出现基因的插入和缺失,仅在部分位置出现点突变,说明基因较为保守。本研究的6个序列与越南毒株Vietnam/Binh21/2015和泰国毒株Thailand/S5018/2015的S1序列同源性较低,为97.7%-97.8%;与中国香港毒株HKU15/155,中国毒株CH/GD01/2015、CHN/JS/2014、CH/SXD1/2015,韩国毒株 KNU14/04,美国毒株USA/Minnesota140/2015、OH/FD22、USA/Illinois272/2014 的 S1 序列都具有较高的同源性,其中与中国毒株CH/GD01/2015,CHN/JS/2014的同源性最高,为99.4%,其次是香港毒株HKU15/155,为99.3%。基因遗传进化系统树显示,进化关系很近,可能起源于同一毒株。PEDV的检测目前主要依赖于RT-PCR和ELISA等实验室方法,虽然其敏感性和准确性较高,但需要依靠仪器设备,并且耗时较长,操作繁琐。而胶体金免疫层析试验(gold immunochromatography assay,GICA)是一种准确、方便、快速的免疫检测方法,非常适用于缺少相关仪器和设备的基层兽医工作单位,也可用于流行病学调查,对于畜禽传染病的预防、控制和研究起到了重要作用。因此,本研究对本实验室研发的PEDV胶体金免疫层析试纸条进行敏感性,重复性,特异性,稳定性,以及临床样品检测实验。实验表明,该试纸条特异性良好,在4℃保存4个月仍可正常使用,具有良好的稳定性。重复性实验中,同批次试纸条的控制线和检测线的条带一致。敏感性实验中,该试纸条随PEDV细胞培养液倍比稀释倍数的增加,检测线条带逐渐减弱,所能检测出的最低的PEDV细胞培养液TCID5o/0.1ml为3.16,通过与双抗体夹心ELISA法、实时荧光定量PCR法以及常规RT-PCR法比较,试纸条所能检测出的最低OD值为1.418,最低浓度为27.85ppb;所能检测出的最低拷贝数为1.10×104(1μL中病毒拷贝数),最高CT值为26.74;敏感性低于常规PCR法。在对临床样品的检测实验中,分别用试纸条和实时荧光定量PCR法对采集的24份猪粪便及肠道组织样品进行检测,有3份肠道组织样品试纸条检测为阳性,其余均为阴性;该24份临床样品的1μL中病毒拷贝数均低于试纸条所能检测到的最低拷贝数(1.10×104)。表明该试纸条的敏感性有待进一步提高。