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脂肪诱导转录物基因FIT1 (Fat-inducing transcript 1)能够加快甘油三脂被打包形成脂肪滴的速度,并且能够促进脂肪滴在细胞中的蓄积。我们先前对FIT1基因所作的多态性和性状关联性分析表明FIT1基因与诸多脂肪相关性状,如肥肉率、肥瘦肉比率等具有极显著或者显著的相关性。进一步分析发现大白猪和梅山猪FIT1基因在序列上存在着明显的差异,预示着来自大白猪和梅山猪的FIT1基因在功能上可能存在较大差异。为了在细胞水平上对FIT1基因的功能进行深入研究,我们在此构建了大白猪和梅山猪FIT1基因的多个真核表达载体,同时利用这些载体进行了初步的转染试验,取得了如下结果：a.扩增获得了大白猪和梅山猪FIT1基因的基因组全序列,序列分析发现大白猪和梅山猪FIT1基因在编码最后一个蛋白结构域的区域存在多处序列差异；b.将大白猪和梅山猪的FIT1基因片段连入pcDNA3.1载体成功构建了大白猪和梅山猪FIT1基因的真核超表达载体；c.将大白猪和梅山猪的FIT1基因连入pEGFP-N1载体,成功构建了FIT1基因的绿色荧光蛋白融合表达载体；d.将连入pEGFP-N1的FIT1基因片段连同EGFP基因片段一起切下来,连入pcDNA3.1载体,成功构建了pcDNA3.1-FIT1-EGFP载体；e.将大白FIT1基因连入phc-Red-N1载体成功构建了融合了红色荧光蛋白的phc-Red-dbFIT1载体；f.比较了Attractene Reagent和Lipo2000两种转染试剂在细胞毒性、转染效率、稳定性等方面的问题,发现Attractene Reagent试剂在本实验条件下的细胞毒性要小于Lipo2000,两种转染试剂在一定的转染体系下都可以获得满意的转染效率,但是Attractene Reagent试剂转染的稳定性相对于Lipo2000的转染稳定性来说有所欠缺；g.用不同质粒在同一个转染体系下转染PK-15细胞,发现即使是在同一个转染体系下,不同质粒导致的转染效率也存在明显的差异；h.用相同的质粒、相同的转染体系同时转染PK-15细胞和C2C12细胞,发现细胞系的不同也可以导致明显的转染效率差异；i.分别用pEGFP-msFIT1、pEGFP-dbFIT1、pcDNA3.1-msFITl-EGFP和pcDNA3.1-dbFITl-EGFP质粒转染PK-15细胞然后作荧光共聚焦观察,发现梅山猪和大白猪FIT1蛋白都分布在细胞质中,分布特征没有明显差异。FIT1基因能够加快甘油三脂的打包速度和FIT1基因与诸多脂肪性状显著相关的事实预示着该基因对脂肪性状具有重要作用。细胞水平的研究将为推动该基因功能方面的研究打下坚实的基础。为了获得更可靠的证据,利用我们所构建的这些载体在细胞水平上做进一步检测将是有意义的。鉴于梅山猪FIT1基因和大白猪FIT1基因在序列上存在的明显差异,这些检测应该着重于研究大白FIT1基因和梅山FIT1基因在脂肪代谢方面的功能差异,如此也可为将来在个体水平上研究FIT1基因的功能并最终将FIT1基因推向实践应用提供更加充分的理论依据。