研究背景:生物免疫治疗已经成为继手术、化疗、放疗后的第四大抗肿瘤治疗方法。人们尝试使用多种免疫细胞(DC、CIK、CTL、NK等)过继转移治疗肿瘤,尽管在许多临床试验中观察到抗肿瘤免疫应答,但临床总体治疗效果仍不尽人意。有必要从临床角度深入了解免疫系统中各成分的相互作用及联合治疗的效果。我们注意到,迄今很少有人研究B细胞在肿瘤免疫治疗方面的作用,其作为特异性免疫系统的重要成分,应予以充分的重视。　　 目的:建立分离、纯化及扩增人外周血B细胞的方法,观察体外B细胞联合CIK细胞治疗肿瘤的效果。　　 方法:1)抽取健康志愿者外周血,采用梯度密度离心法分离PBMC;2)用CD19+磁珠从PBMC中分离并纯化B细胞；3)以CD40抗体和LPS启动后,分别以不同细胞因子及组合扩增B细胞:①IL-2、②IL-4、③IL-2+IL-4、④IL-2+IL-4+BAFF;4)使用流式细胞术检测体外扩增后B细胞的CD80表型:5)采用ELISA法检测细胞培养上清液中IgG和IL-10的分泌情况；6)以BGC-823胃癌细胞系为靶细胞,分别以B细胞联合CIK细胞和DC联合CIK细胞为效应细胞,用LDH释放法比较两组免疫细胞抗肿瘤能力。　　 结果:1)磁珠分选后活细胞率>98％,B细胞纯度达到97.86％±0.0090,细胞回收率达到92.24％±0.0041；2)多种细胞因子辅助下B细胞体外扩增效果不同,IL-2组,IL-2+IL-4组和IL-2+IL-4+BAFF联合组细胞扩增均明显优于对照组(P<0.01),联合组亦优于IL-2组和IL-2+IL-4组(P<0.05),而IL-4组与对照组无统计学差异；3)体外扩增4天的B细胞表型检测显示,IL-4组、IL-2+IL-4组和IL-2+IL-4+BAFF联合组的CD80比例明显高于对照组(P<0.05),联合组亦优于IL-4组和IL-2+IL-4组(P<0.05),而IL-2组与对照组无统计学差异(P>0.05)；4)ELISA检测培养上清液中的IgG和IL-10发现IL-2+IL-4+BAFF联合组可以增强B细胞IgG和IL-10的分泌能力(P<0.01)；5)B细胞联合CIK对肿瘤的杀伤明显优于DC联合CIK组(P<0.001)。而不同培养方式的B细胞联合CIK对肿瘤的杀伤效果不同,IL-2+IL-4组和IL-2+I1-4+BAFF联合组均优于对照组(P<0.001),联合组亦优于IL-2+IL-4组(P<0.01);　　 结论:1)IL-2可以有效地促进B细胞增殖,可以用于B细胞体外扩增；2)IL-4不能直接促进B细胞扩增,但可以间接促进B细胞扩增:3)BAFF可以激活B细胞并提高其分泌能力:4)B细胞联合CIK细胞杀伤肿瘤的效果明显高于DC联合CIK细胞,所以B细胞有望用于肿瘤过继免疫治疗。