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目的:
通过TaqmanrealtimePCR技术检测microRNA-224(miR-224)在大肠癌癌组织、相应正常粘膜中的表达水平，分析其表达与大肠癌患者临床病理特征之间的关系。同时进一步应用平板克隆形成实验、MTT比色分析法以及流式细胞技术等方法检测miR-224对结肠癌细胞增殖、凋亡等过程的影响。探讨miR-224作为肿瘤标记物对结直肠癌的诊断价值，进一步阐明miR-224在肿瘤发生发展过程中的生物功能，以便为大肠癌的早期诊断、治疗提供理论和实验依据。
方法:
1、收集2011年10月至2012年10月河北医科大学第一医院、河北医科大学第四医院的57例大肠癌患者肿瘤组织及对应无瘤切缘正常粘膜新鲜标本。
2、应用Taqman实时荧光定量PCR方法检测癌组织及正常黏膜组织中miR-224的表达水平，分析miR-224的表达与大肠癌临床病理特征的关系。
3、选取8种结肠癌细胞株(SW620、SW480、SW1116、HCT116、HT29、DLD1、LOVO、Caco-2)进行培养，在各细胞株中检测miR-224的表达情况，并与正常组织黏膜中的表达进行比较。
4、比较miR-224在结肠癌细胞株HCT116p53+/+细胞和HCT116p53-/-细胞中二者的表达差异，分析其与p53基因的关系。
5、在结肠癌细胞株HCT116细胞株中转染miR-224，将转染miR-224模拟物的作为实验组，同时设立对照组（转染阴性对照试剂）及空白组，转然后48小时检测三组细胞中miR-224的表达水平。
6、通过平板克隆形成试验观察转染miR-224前后细胞集落形成情况。转染miR-224后1d、2d、3d、4d、5d分别应用MTT比色分析法检测5个时段的OD值，绘制细胞生长曲线以观察细胞增殖改变情况。
7、应用流式细胞技术检测转染前后细胞凋亡的变化情况。
8、应用spss13.0软件对数据进行统计分析，数据以中位数（四分位数间距）或均数±标准差表示，两组间配对样本采用Wilcoxon检验或t检验，两组间独立样本采用Mann-Whitney检验，多组间比较采用单因素方差分析，均以P＜0.05为差异有统计学意义。
结果:
1、miR-224在57例大肠癌癌组织及对应无瘤切缘正常粘膜中的表达水平分别为1.812(0.8685，4.653)和0.4073(0.1870，0.8515)，大肠癌癌组织中的表达较正常黏膜组织显著上调(P＜0.0001)。
2、miR-224的表达水平均与大肠癌患者的病理分型密切相关，即直肠癌组织中的表达明显高于结肠癌(P=0.0215)，Dukes分期为C，D期的患者明显高于A，B期的患者(P=0.0239)，同时发生淋巴结转移的患者高于未发生淋巴结转移的患者(P=0.0488)，而与性别、年龄、病理分型、浸润深度、分化程度无关（均P＞0.05）。
3、miR-224在结肠癌细胞株SW620、SW480、SW1116、HCT116、HT29、DLD1、LOVO和Caco-2中的表达均明显高于正常粘膜组织（均P＜0.05）。miR-224在HCT116p53+/+细胞和HCT116p53-/-细胞中的表达水平无明显差异(P＞0.05)。
4、转染24h后，实验组细胞中miR-224的表达明显高于阴性对照组及空白对照组。
5、HCT116中转染miR-224mimics实验组和对照组细胞集落数分别为153.67±13.48和82±6.11，miR-224mimics实验组较对照组细胞集落明显增多(P=0.0397)，对照组和空白组之间差别无统计学意义。
6、转染miR-224组在转染1d、2d、3d、4d、5d，5个时段OD值均高于对照组(P=0.022)，对照组与空白实验组之间差别无统计学意义。
7、HCT116细胞中，空白组和对照组间凋亡率无明显差异;实验组早期凋亡率（22.35±0.403）％明显低于对照组（26.713±0.745）％，差异有统计学意义(P=0.0216)，实验组晚期凋亡率（8.97±0.911）％与对照组(12.587±2.000)％无明显差异。
结论:
1、发现miR-224在大肠癌中高表达，并且直肠癌、伴有淋巴结转移、DukesC期和D期的癌组织中的表达显著高于结肠癌、无淋巴结转移、Dukes分期较早的患者，此结果提示miR-224在大肠癌的发生发展过程中可能发挥促癌基因的作用，并可能通过某种机制促进了直肠癌的发生及肿瘤恶性程度的进展。
2、miR-224表达上调与p53基因尚未发现直接关系，其可能通过非p53通路发挥其促癌作用。
3、miR-224可促进结肠癌细胞的增殖，并可抑制结肠癌细胞的早期凋亡过程。
4、深入研究miR-224促癌机制可为阐明结肠癌发病机制提供理论依据。并对结肠癌患者早期诊断和靶向治疗提供新的思路。