【摘 要】
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在无核珍珠培育过程中,供片蚌和育珠蚌都会对珍珠质量产生影响,同时插片后育珠蚌的生长性能也会存在差异,因此为了探究三角帆蚌(S)和褶纹冠蚌(Z)相互插片后生长性状间的差异和相关性,以及各组合育珠性能差异,利用三角帆蚌和褶纹冠蚌作为育珠蚌和供片蚌,获得4个育珠蚌组合,测量各育珠组合的体质量、壳长、壳高和壳宽,比较4个育珠蚌组合与未插片的三角帆蚌、褶纹冠蚌对照组在插片后生长性状的差异,对各生长性状进行统
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在无核珍珠培育过程中,供片蚌和育珠蚌都会对珍珠质量产生影响,同时插片后育珠蚌的生长性能也会存在差异,因此为了探究三角帆蚌(S)和褶纹冠蚌(Z)相互插片后生长性状间的差异和相关性,以及各组合育珠性能差异,利用三角帆蚌和褶纹冠蚌作为育珠蚌和供片蚌,获得4个育珠蚌组合,测量各育珠组合的体质量、壳长、壳高和壳宽,比较4个育珠蚌组合与未插片的三角帆蚌、褶纹冠蚌对照组在插片后生长性状的差异,对各生长性状进行统计学分析。对不同组合育珠蚌所产珍珠的质量和数量等指标进行测量,分析不同组合育珠的差异。骨形态发生蛋白(BMP)家族在骨骼发育、细胞增殖与分化、心脏和血管发生,个体生长等方面具重要作用,在软体动物中与生长发育和生物矿化相关。本实验从三角帆蚌珍珠囊转录组中筛选出BMP2和BMP10基因,克隆获得c DNA序列全长,通过序列分析、荧光定量、原位杂交和RNA干扰等实验对BMP基因的功能进行研究。1.插片后三角帆蚌和褶纹冠蚌生长、育珠性能的比较无核育珠手术影响珍珠蚌的生长性能,以三角帆蚌为育珠蚌的组合生长性状优于对照组,而以褶纹冠蚌为育珠蚌的组合插片后生长受抑制。插片1年各组合间差异较大,插片2年差异缩小。各组合生长性状间存在极显著相关性(P<0.01),通径分析表明壳长和壳宽是影响三角帆蚌对照组体质量的主要性状,而在三角帆蚌育珠组与对照组相比存在差异。褶纹冠蚌各组合影响体质量的主要形态性状为壳长,不同组合的间接影响因素不同。三角帆蚌和褶纹冠蚌同种插片组合(S-S、Z-Z)成珠率较高,异种珍珠蚌插片组合成珠率较低。S-S育珠组合所育珍珠最圆,但珍珠大小在各育珠组内并不是最优,Z-S育珠组合成珠率低,珍珠不圆但所产珍珠较大。以上结果表明无核育珠手术改变育珠蚌生长性能,三角帆蚌插片后相对于对照组生长较好,而褶纹冠蚌插片后相对于对照组生长较慢,三角帆蚌同种插片生长及育珠效果最好。2.三角帆蚌BMP2基因鉴定和功能研究本实验从三角帆蚌外套膜中分离并鉴定BMP2基因,其c DNA序列全长为2889bp,其中5’-UTR为688bp,3’-UTR为998bp,开放阅读框(ORF)为1203bp,编码了400个氨基酸。BMP2蛋白无跨膜结构,包含一个信号肽(1-23aa)、1个TGF-β前肽结构域(29-259aa)和1个典型的TGF-β结构域(299-400aa),TGF-β结构域结构高度保守,包含了7个半胱氨酸残基。组织表达分析表明BMP2在三角帆蚌各组织的鳃和闭壳肌中表达最高,中央膜次之;在胚胎发育各时期中稚蚌时期表达最高,钩介幼虫和囊胚期次之;随着蚌龄的增加BMP2基因呈上调趋势;BMP2基因在破壳后表达上升,在破壳处理7d后表达量达到最高,BMP2对于贝壳形成可能具有重要作用;在早期珍珠形成过程中(0h-35d)BMP2基因在插片后28d高表达,BMP2参与珍珠的形成并在珍珠层的形成中起重要作用,BMP2在珍珠囊和鳃中的表达趋势较为一致,推测珍珠形成过程中在鳃和珍珠囊中BMP2基因的作用存在某种关联,可能与钙代谢相关;原位杂交结果表明,在三角帆蚌外套膜的壳皮沟以及缘膜部上表皮检测到较强的信号。RNA干扰结果显示注射干扰链后对鳃的干扰率为85.7%,对外套膜的干扰率47.8%,扫描电镜结果表明贝壳新生棱柱层和珍珠层形态发生变化,BMP2与棱柱层和珍珠层相关。以上结果表明BMP2基因可能参与了三角帆蚌生长发育并在三角帆蚌生物矿化中起重要作用,此外BMP2还可能与鳃中钙离子吸收代谢相关。3.三角帆蚌BMP10基因鉴定和表达分析本实验克隆得到三角帆蚌BMP10,c DNA序列全长2477bp,其中包括5’-UTR471bp,3’-UTR为623bp,开放阅读框(ORF)为1383bp,编码了460个氨基酸。BMP10不存在跨膜结构,包含一个信号肽(1-25aa)。蛋白二级结构包括一个TGF-β前肽结构域(104-300aa)和一个TGF-β结构域(358-460aa),TGF-β结构域包含了7个半胱氨酸残残基。组织表达分析表明BMP10在三角帆蚌各组织中均有表达,鳃中表达最高,中央膜次之;在胚胎发育各时期中卵裂期表达最高,稚蚌期次之;随着蚌龄的增加BMP10基因的表达量下降,BMP10可能三角帆蚌生长发育相关;BMP10基因在破壳后24h-48h表达上升,可能与贝壳形成与修复相关;在早期珍珠形成过程中(0h-35d)BMP10基因在插片后14d-35d高表达,BMP10参与珍珠的形成并在珍珠层的形成中起重要作用;原位杂交结果表明,在三角帆蚌边缘膜及缘膜部上表皮细胞检测到较强的信号,BMP10与贝壳棱柱层珍珠层相关。以上结果表明BMP10基因在三角帆蚌生长发育、生物矿化中起重要作用。
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