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背景近些年来,随着介入诊疗技术的不断发展与进步,在冠心病的诊断中被广泛应用,但相关研究显示因胸痛不适而行冠脉造影的患者中有近40%的患者造影结果未见到血管明显狭窄,考虑其可能与冠状动脉微循环障碍有关,因此冠脉微循环障碍性疾病越来越受到重视,而影响其发生的相关机制有心肌毛细血管阻力增加、冠脉微循环的侧支血流、冠脉再通、微血栓堵塞等,其中由冠脉再通(包括溶栓和支架介入过程)造成原位血栓或者微栓子的脱落以及一些发生在急性冠脉综合征或者稳定性心绞痛患者中远端的微血栓堵塞微血管成为重点的关注对象。目前对于冠脉微循环障碍(Coronary microcirc ulation disorders,CMD)评估方法和治疗手段仍然有限,临床需要我们进一步探索。针对较为常见的由微血栓造成的微循环障碍可以作为研究的核心,如何建立客观化与标准化的冠脉微栓塞模型是其研究的基础条件。既往报道中可见到以物理损伤和化学性刺激为主要手段进行造模的方法有很多,但是均有各自优缺点,目前尚无标准化可被广泛应用的实验造模方法,因此有必要创建和优化出一种新型的动物模型,为临床科研提供更好的研究依据。临床冠脉微循环障碍表现与王显教授团队基于络风内动理论学说创新性的提出“缺血性络风内动”病机较为相似,因此我们将从气虚血瘀的方向出发,高度模拟其发生发展过程,探索一种合理的客观的新型冠状动脉微栓塞复合模型,完善络风内动证模型建立。目的依据现代科学技术构建符合临床的、合理的、具有易行性和广泛适用性的缺血性络风内动证动物模型。方法将体重为260±20g清洁级健康的SD雄性大鼠随机分组:假手术组(sham组)和模型组(CME组),前者30只,后者40只,根据不同观察时间点,将sham组和CME组再细分为术后1h、术后3h、术后1d、术后3d、术后1w共5个亚组,每组8只。术前取2只正常大鼠腹主静脉取血7-8ml/只,静置后放置于37℃温箱中隔夜形成血块,用玻璃研磨器将其研磨成粉末状,通过38um筛板过筛后使大小均一,制作成同种异体血栓颗粒备用。采用开胸后假手术组于主动脉根部注入0.2ml纯水,模型组则注入微血栓(2.5mg)和月桂酸钠的混合液(0.75mg/ml)0.2ml,分别在术后相应时间点进行病理学检测和血液学检测,HE病理切片染色法观察大鼠心肌组织微血栓形成以及心肌微梗死的组织病理学表现,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血浆中血管假血友病因子(vWF)、肌钙蛋白I(cTnI)水平。结果1、实验条件及方法探索最佳颗粒制备为同种异体血栓在37℃条件下烘烤过夜,注射方式为血栓微颗粒和月桂酸钠混合后同时注入,最佳混合比例为2.5mg血栓微颗粒+0.75mg/ml月桂酸钠0.2ml,注射部位以靠近主动脉根部最近方便操作处,垂直进针约2mm。2、实验大鼠一般情况各组实验动物起点和终点体重无明显差异,整体死亡率为20%,成模率为80%。3、组织病理学检查(1)术后1小时和术后3小时模型组以微血栓表现为主,且术后1小时高于术后3小时,两组之间有统计学差异(p<0.05),余时间段未见明显血栓,假手术组未见微血栓形成;(2)术后3小时即有血管内皮损伤和炎细胞浸润,之后各时间段亦可见相应表现;(3)术后3天和术后1周时模型组心肌以多发性、灶性微梗死表现为主,其中术后3天是微梗死占视野中心肌总面积百分比大于术后1周,两组之间无统计学差异(p大于0.05),其他时间点及假手术组均未见明显梗死灶。4、血液学检查(1)与假手术组相比,模型组各时间点cTnI浓度均高于相应时间点的假手术组,术后1小时和术后1天时变化明显,有统计学差异(p<0.05);与模型组术后1小时相比,模型组其他时间点均显著低于术后1小时,有统计学意义(p<0.01);(2)与假手术组相比:模型组术后1小时至术后3天vWf浓度均低于假手术组,术后1周时高于假手术组;模型组术后1天和术后3天时vWf水平明显降低,有统计学意义(p<0.01),余时间点之间对比无统计学差异(p>0.05);模型组中术后1小时至术后3天时vWf浓度呈逐渐降低趋势,术后1周时较前略增高,但不同时间点之间两两比较无统计学差异(p>0.05)。5、中医证候评价(1)络虚:模型通过损伤内皮,模拟气血不和、络气亏损状态,术后大鼠出现活动缓慢,精神迟钝,眯眼频繁,耳廓、爪甲与舌象可见色淡苔白等症状均为络虚的表现;(2)血瘀:同种异体血栓颗粒可以高度模拟“瘀血”病理产物,术后1小时和3小时微血栓形成、术后3天和术后1周时病理切片HE染色可见多发性灶性微梗死表现以及术后1周时模型组大鼠舌质暗红伴有瘀血等症状亦是血瘀的表现;(3)动风征象:术中大鼠开胸注入药剂后导致发病急骤,病情变化多端,可通过小血管内血栓快速形成、心电图急性ST-T变化、血浆cTnI升高、vWf迅速减低等实验室相关检查均充分体现了“风”的特点。结论:1、通过向主动脉根部注入同种异体血栓微颗粒和月桂酸钠混合液,可以初步建立缺血性络风内动证动物模型;2、血栓微颗粒和月桂酸钠溶液最佳配比方式为:2.5mg血栓微颗粒溶于0.75mg/ml月桂酸钠溶液0.2ml。