前列腺素A<,1>对细胞因子和核因子-κB的影响

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目的:观察前列腺素A1(PGA1)对脂多糖(LPS)诱发人外周血单个核细胞(单核细胞和淋巴细胞总称,PBMC)释放促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6及核因子-κB(NF-κB)核转位的影响,初步评价PGA1的抗炎作用和机制。方法采集健康志愿者外周血6例,肝素抗凝,羟乙基淀粉沉降红细胞,Ficoll-Hypaque法分离PBMC。分为两部分:1研究PGA1对细胞因子的影响将接种到24孔培养板的PBMC随机分为:(1)空白组;(2)单纯LPS组;(3)5个不同浓度的PGA1处理组。PGA1处理组分别以4μmol/L、8μmol/L、12μmol/L、16μmol/L和20μmol/L的PGA1处理PBMC4小时后,再以LPS(10μg/ml)刺激PBMC8小时和24小时,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。2研究PGA1对NF-κB核转位的影响将接种到6孔培养板的PBMC随机分为:(1)空白组;(2)单纯LPS组;(3)5个不同浓度的PGA1处理组。PGA1处理组分别以4μmol/L、8μmol/L、12μmol/L、16μmol/L和20μmol/L的PGA1处理PBMC4小时之后,再给予LPS(10μg/ml)刺激2小时。采用Western免疫印迹方法检测细胞核和细胞浆NF-κB的含量。结果与空白组比较,LPS刺激PBMC8小时和24小时后,培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均显著升高。预先用不同浓度PGA1处理4小时后再给予LPS刺激的PBMC,其8小时和24小时培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均随PGA1浓度的升高而出现不同程度的降低,当PGA1浓度达到12μmol/L时,上述3种促炎细胞因子含量显著低于单纯LPS组3<WP=5>广西医科大学2001级硕士研究生学位论文(P<0.05)。与空白组比较,单纯LPS组PBMC于LPS刺激2小时后,细胞核NF-κB含量显著升高,细胞浆NF-κB则显著降低,提示LPS介导了NF-κB核转位。与单纯LPS组比较,PGA1处理组呈剂量依赖性抑制LPS介导细胞核NF-κB水平升高的作用。结论PGA1呈剂量依赖性抑制LPS诱发PBMC释放促炎细胞因子,PGA1呈剂量依赖性抑制LPS介导的NF-κB核转位,阻断了LPS对NF-κB的激活,从而抑制LPS诱发PBMC释放细胞因子。
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