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目的:轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)属发生在老年人群中常见的神经系统退行性病变,是介于正常衰老和痴呆之间的一种临床状态,是老年痴呆的主要危险因素。中医学认为“呆病多痰”,“治呆不治痰非其治也”。结合本课题组前期研究结果,我们推测,β淀粉样蛋白的毒性作用和NMDA受体介导神经突触可塑性相关分子机制表达异常是MCI的重要致病因素,可能与中医学痰邪致病密切相关。本课题选用13月大鼠D-半乳糖皮下注射合并半高脂饲料喂养复合造模制作老年轻度认知功能障碍大鼠模型,从行为学、神经病理、Aβ及其分泌酶、NMDA受体亚基蛋白表达等方面,探讨涤痰汤对MCI的作用及机制。方法:13月龄SPF级SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、涤痰汤高剂量组(以下简称“涤高组”)、涤痰汤低剂量组(以下简称“涤低组”)、西药组,每组12只,另设3月龄SPF级SD青年大鼠12只作为青年组对照。参照文献造模方法,将模型组、涤高组、涤低组、西药组均每日颈背部皮下注射D-半乳糖50 mg?kg-1体重,自正式实验第5周起同时给予半高脂饲料喂食,至第8周末,构建老年认知功能障碍大鼠模型。涤高组、涤低组、西药组大鼠,于第5周开始灌胃给药,涤痰汤低、高剂量组给药量分别为涤痰汤折合生药量4.275、8.55g·kg-1体重,西药组给药量为盐酸多奈哌齐0.9mg?kg-1体重,空白组、模型组、青年组给予等容积的蒸馏水灌胃。各组均按10 mL?kg-1灌胃,每日1次,至第8周末止。采用Morris水迷宫、穿梭箱实验观察各组大鼠学习记忆能力;生化比色法检测大鼠血清、皮质SOD、MDA水平;光镜、透射电镜观察大鼠海马组织形态学变化;酶联免疫吸附法检测大鼠海马Aβ1-42含量;免疫组化法观察大鼠海马组织PS-1、PS-2表达;生化比色法检测大鼠海马、皮质神经递质Ach、Glu含量;酶联免疫吸附法检测NGFβ、BDNF神经生长因子含量水平;免疫组化法观察大鼠海马NR2A、NR2B表达情况,利用realtime RT-PCR检测nr2a、nr2b的mrna表达量。结果:1.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠学习记忆及抗氧化能力的影响:(1)morris水迷宫实验中,模型组大鼠较青年组、空白组定位航行寻找平台逃避潜伏期、空间探索实验平台穿越次数、目标象限时间均有显著性差异(p<0.05);与模型组相比,涤高组、西药组潜伏期均明显缩短(p<0.01),涤低组潜伏期亦缩短(p<0.05)。穿梭箱实验中,模型组较空白组大鼠电击次数明显增多(p<0.05),主动逃避潜伏期时间显著延长(p<0.01);与模型组比较,涤高组、涤低组、西药组大鼠电击次数、主动逃避潜伏期时间均有显著性差异(p<0.05)。(2)抗氧化能力:模型组较青年组大鼠皮质、血清sod水平均显著下降(p<0.05),皮质mda水平均显著下上升(p<0.01);与模型组相比,涤痰汤各剂量组大鼠血清、皮质sod水平均显著升高(p<0.05),血清、皮质mda水平均显著下降(p<0.05)。2.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠海马组织形态学的影响:(1)海马he染色结果:模型组大鼠海马ca1区大量神经元锥体细胞结构破坏、排列分布散乱,大量细胞胞体缩小、正常锥体细胞数量明显减少;与模型组相比,涤痰汤各剂量组正常锥体细胞数量明显增多。(2)透射电镜结果:模型组与青年组比较,有髓神经纤维平均直径增加,神经纤维髓鞘厚度明显增厚;与空白组比较,神经毡内突触数量减少;突触间隙结构不清晰,突触前线粒体嵴模糊。与模型组相比,涤痰汤各剂量组线粒体结构大致正常,突触间隙结构较清晰,突触后膜的致密物质较厚。3.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠海马aβ1-42含量及ps-1、ps-2表达的影响:与空白组比较,模型组大鼠海马ca1区ps-1、ca3区ps-2阳性表达增多(p<0.01),海马aβ1-42含量上升(p<0.05)。与模型组相比,涤低组、涤高组大鼠海马aβ1-42含量下降(p<0.05),海马ps-1、ps-2表达均下降(p<0.01)。4.涤痰汤对老年轻度认知功能障碍大鼠海马神经递质及神经生长因子含量的影响:与空白组相比,模型组大鼠的海马、皮质ach含量均显著下降(p<0.05),皮质glu含量均显著上升(p<0.05);海马组织ngfβ、bdnf含量亦下降(p<0.05);与模型组相比,涤高组、西药组大鼠的海马、皮质ach含量均显著上升(p<0.01),涤高组大鼠的海马、皮质glu含量显著下降(p<0.01),西药组、涤低组大鼠的海马、皮质glu水平亦下降(p<0.05);涤高组海马组织ngfβ、bdnf含量均显著升高(p<0.01)。5.涤痰汤对模型大鼠海马nmda受体亚单位表达的影响:模型组较青年组、空白组大鼠海马各区nr2a、nr2b表达明显减少(p<0.05),nr2a、nr2bmrna基因表达量下调(p<0.05);与模型组相比,涤高组、涤低组、西药组大鼠海马nr2a、nr2b各区表达均增加(p<0.01),涤高组、涤低组、西药组nr2a、nr2bmrna基因表达量明显上调(p<0.05);与西药组相比,涤高组海马nr2a、nr2b各区表达有显著性差异(p<0.01)。结论:1.模型大鼠的学习记忆能力和空间定位能力下降明显,抗氧化能力减退,海马病理表现与自然衰老大鼠相似,是老年轻度认知功能障碍的理想模型。2.改善机体(大脑皮质、血清)抗氧化能力,逆转海马ca1区突触结构损伤,可能是涤痰汤保护老年mci模型大鼠突触功能的作用机制。3.涤痰汤可调节大鼠海马、皮质内ach、glu含量,增加突触传递。增加大鼠海马ngf、bdnf蛋白表达,促进新生神经元和突触的生长和分化。4.通过下调γ-分泌酶(ps1、ps2)的表达起到降低aβ1-42的关键作用,提高神经元表面nmda受体亚基水平,保护突触功能,可能是涤痰汤改善老年mci模型大鼠突触可塑性的重要机制。主题词:轻度认知功能障碍,n-甲基-d门冬氨酸受体,痰邪,@涤痰汤