论文部分内容阅读
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)感染引发猪副猪嗜血杆菌病,高发病率和高死亡率使其成为全球范围内危害养猪业的主要病菌之一。截至目前为止,我们对其发病分子机制及宿主应答机理认识仍不够清晰。本实验室前期对感染HPS的猪脾脏进行转录组测序,发现猪S100A8, S100A9和S100A12基因表达显著上调,用LPS及poly I:C模拟细菌及病毒刺激均能有效引起上述基因的上调表达,并且呈现相同的表达规律。为了揭示这几个基因的功能,本研究选取猪S100A12基因,对其转录调控及信号通路进行功能研究。取得了以下结果：1.运用双荧光素酶报告系统对猪S100A12的转录调控进行研究,结果表明猪S100A12基因受转录因子Sox-5负调控。2. RT-PCR方法检测猪S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因在成年长白猪7个组织及两个猪源细胞系的表达情况,结果表明猪S100A8, S100A9和S100A12基因在脾脏、肺脏中高表达,并且三者呈现一致的表达模式；猪RAGE基因仅在肺组织中高表达。3.在PK-15细胞中S100A12不能通过RAGE信号通路激活NF-κB,但S100A12能通过TLR4信号通路激活NF-κB。4.在C2C12细胞中S100A12可以与RAGE结合有效激活NF-κB,并且在一定范围内随着S100A12转染剂量的增加,NF-κB活性增加；S100A8/A9共转染可以激活NF-κB活性,RAGE可以抑制S100A8/A9的激活作用。5.运用BIFC技术研究发现RAGE可能与NCK1、GrB2及RHOA存在互作关系。亚细胞分布结果表明猪NCK1蛋白主要在细胞质中表达,GrB2蛋白主要在细胞核中表达,RHOA蛋白则呈现全细胞表达。