大肠癌中NRP2表达调控相关miRNA的预测及鉴定

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目的:生物信息学技术预测大肠癌中可能调控神经纤毛蛋白2(neuropilin-2,NRP2)表达的相关微小RNA (microRNA, miRNA),鉴定其对NRP2的调控作用,初步阐明其调控机制。方法:1.生物信息学技术预测NRP2调控相关的miRNA,结合大量文献及预测评分,筛选与肿瘤密切相关的miRNA进一步研究。2.使用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测miRNA-486-5p在大肠癌组织中的表达,统计分析其与临床病理参数的关系。3.构建合成miR-486-5p过表达质粒。使用脂质体法瞬时转染结肠癌细胞株SW620,脂质体法转染质粒以上调细胞中miR-486-5p的表达。qRT-PCR验证转染效果,Western blot检验miR-486-5p对NRP2蛋白的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-486-5p对NRP2的调控机制。4.采用Transwell小室实验、MTT实验和流式细胞术检测miR-486-5p对SW620细胞体外生物学行为的影响。结果:1. TargetScan软件预测25条miRNA可能参与了NRP2转录后调控。查阅大量文献,其中miRNA-486-5p肿瘤发生发展密切相关;miRanda (v1.9)软件预测NRP2为miRNA-486-5p的潜在靶基因,因此选择miRNA-486-5p作为研究目标。2.结直肠癌组织中miRNA-486-5p表达明显下调(P<0.05),临床病理分析显示miRNA-486-5p的表达与肿瘤的分化、大小、淋巴结转移、TNM分期及远处转移密切相关,而与患者年龄、性别无关。3.脂质体法转染过表达质粒可上调结肠癌细胞株SW620的miR-486-5p表达,可抑制细胞中NRP2蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-486-5p可与NRP2 mRNA 3’非转录区(3’ untranslated region,3’ UTR)直接结合,发挥转录后翻译的抑制作用。4. miRNA-486-5p在体外可通过抑制细胞增殖、诱导凋亡而抑制结肠癌SW620细胞生长,同时可抑制癌细胞的迁移能力。结论:miRNA-486-5p可在转录后翻译水平抑制结肠癌细胞SW620中NRP2的表达,可能是通过结合NRP2 mRNA 3’UTR直接结合而发挥作用。大肠癌中NRP2表达上调可能与miRNA-486-5p表达下调相关。
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