夏枯草不同部位的质量研究

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[目的]对夏枯草药材的不同部位进行化学成分的比较研究,寻找出夏枯草药用部位的特征成分,建立特征成分、主要活性成分的含量测定方法,为完善夏枯草药材质量标准提供依据;对不同产地夏枯草的果穗部位进行水分、灰分的含量测定,考察其不同产地药材的储存质量,为保证夏枯草药材入药的安全性和有效性提供参考;对17批夏枯草药材进行指纹图谱的研究,建立夏枯草标准药材的对照图谱,为全面建立夏枯草药材的质量标准提供依据。[方法]1、夏枯草不同部位的化学成分研究:(1)采用HPLC指纹图谱对不同部位、不同产地的夏枯草进行比较研究,色谱条件为:色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.5mm×300mm,6pm);检测波长:300nm;流速:0.8mL.min-1;流动相:乙腈-1.0%醋酸水系统进行梯度洗脱;进样体积:10μL。(2)采用70%乙醇回流提取法,通过柱色谱对迷迭香酸和异迷迭香酸苷进行分离,通过理化性质的检测和波普数据的解析得到该两物质的结构;采用HPLC法建立两者的含量测定方法,色谱条件为:色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(4.5mm×300mm,6μm);流速:12mL.min-1;检测波长:320nm;流动相:乙腈(A)-1.0%醋酸水(B)进行梯度小船坞脱,该梯度为10%A→27%A;进样体积:10μL。(3)建立有效成分熊果酸的UPLC含量测定法,色谱条件为:色谱柱:型号为ACQUITYUPLCBEH Cl8(2.3mm×l50mm,1.5μm);流动相:甲醇-1.0%冰乙酸水(80%)进行洗脱;检测波长:211nm;流速:04mL/min;进样量:1μL。2、夏枯草果穗水分、灰分的含量测定:按照2010年版《中国药典》附录1X H中水分测定法中的第一法进行水分测定;附录ⅨK灰分测定法测定总灰分与酸不溶性灰分的含量。3、采用HPLC指纹图谱法,通过中药色谱指纹图谱的相似度的评价,建立夏枯草标准药材的对照图谱,色谱条件为:色谱柱:Agi lentEclipse XDB-C18(4.5mm×300mm,6μm):检测波长:291nm;流速:0.8mL.min-1;流动相:乙腈(A)-1.0%醋酸水(B)系统进行梯度洗脱;进样体积:10μL。[结果]1、通过7批夏枯草不同部位HPLC指纹图谱的比较,表明异迷迭香酸苷为夏枯草药用部位果穗的特征成分,其色谱峰在其他部位几乎检测不到,而主要活性成分迷迭香酸在各个部位均含有,目.峰面积最大,表明含量最高。在0.0046-0.12μg范围内,异迷迭香酸苷呈良好的线性关系(r2=0.9996),平均回收率为100.1%,RSD值为1.71%,异迷迭香酸苷的含量为0.14‰-0.45‰。迷迭香酸在0.051-1.28μg范围内呈良好的线性关系(r2=0.9993),平均回收率为99.96%,RSD值为1.08%,迷迭香酸的含量为1.63%-4.93%。熊果酸在0.1025-0.41mg的范围内呈线性(r2=0.9993),平均回收率为99.75%,RSD值为1.58%。熊果酸的含量为0.26%-0.52%。2、不同来源7批夏枯草药材中水分含量最高的为13.80%,最低的为11.41%,水分均值为12.63%。总灰分含量最高的为16.79%,最低的为8.01%,总灰分含量均值为10.44%。酸不溶性灰分含量最高的为8.16%,最低的为6.03%,酸不溶性灰分含量均值为6.98%。3、建立了17批夏枯草药材的指纹图谱,有13个共有峰,多数峰可以达到较好分离,具有较高的相似度。[结论]1、HPLC法操作简便,指纹图谱定性灵敏,定量准确,可作为夏枯草药材质量控制标准的有效方法。UPLC的定量快速精准,可作为熊果酸含量测定的快捷方法。2、不同产地的夏枯草果穗水分、灰分的含量相差比较大,应该对每个市场上的中药材进行标准化的检测,以确保其入药质量的安全性和有效性。3、17批夏枯草药材HPLC指纹图谱法准确、重复性好,建立的指纹图谱检测标准,可作为夏枯草药材质量评价与品种鉴别的重要依据之
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