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目的: Cdc2基因所编码的蛋白是一种重要的细胞周期蛋白,在包括骨肉瘤MG63细胞的大多数肿瘤细胞中呈高表达。在本研究中采用siRNA干扰技术,抑制骨肉瘤MG63细胞中Cdc2基因的表达,观察Cdc2基因表达抑制后对MG63细胞增殖及凋亡的影响。 方法:构建针对Cdc2基因表达的特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/Cdc2及对照psilencer2.1-U6/scramble质粒,通过脂质体介导稳定转染入人骨肉瘤MG63细胞株,通过Western blotting和定量PCR检测MG63细胞中Cdc2在蛋白和mRNA水平的表达情况,免疫荧光进一步检测细胞形态变化和Cdc2表达的情况,MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/Cdc2对MG63细胞增殖能力和细胞周期的影响,Western blotting检测细胞凋亡蛋白Bcl-2,Bax的表达情况。 结果:(1)经重组质粒DNA经测序鉴定,成功构建了pSilencer2.1/SiRNA重组质粒(2)将所构建的pSilencer2.1/SiRNA重组质粒分别转染骨肉瘤MG63细胞, hygromycin筛选阳性细胞克隆,经Western blotting和RT-PCR法检测结果表明,成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/Cdc2质粒的MG63细胞(MG63-SiRNA/Cdc2),和阴性对照细胞(MG63-SiRNA/Scramble),并通过灰度分析发现,MG63-SiRNA/Cdc2细胞中Cdc2mRNA和蛋白表达与MG63-SiRNA/Scramble细胞相比沉默效率分别为86％和89％。(3)MTT法检测发现干扰Cdc2的表达可以抑制MG63细胞的增殖,流式细胞术检测细胞主要易聚积于G2/M期, G0/G1期,同时S期细胞减少。Western blotting检测发现,干扰Cdc2基因的表达对MG63细胞中的凋亡蛋白Bcl-2,Bax的表达影响不大。 结论: Cdc2基因可能参与了肿瘤的发生过程,并与肿瘤的增殖有关,通过SiRNA干扰Cdc2的表达能抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖,但对其凋亡的影响不大。