随着分离技术的不断发展,手性分离在分析化学、医药、环境和生命科学领域得到了越来越多的研究。氨基酸(amino acids,AAs)作为一种重要的手性化合物,一直被认为只有L型氨基酸(L-AAs)在自然界中存在,直到20世纪70年代,才在人体中发现了少量D型氨基酸(D-AAs)的存在。由于D-AAs在生命细胞的许多过程中起到重要作用,同时其在人体中的水平受D型氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase,DAAO)的调节,其水平紊乱会导致许多疾病的发生。因此,D-AAs的含量及DAAO的活性研究在生物分析科学中尤为重要。但是,在生物体中,DAAO具有广泛的底物特异性和大量的L-AAs的存在都将会影响DAAO活性检测的可靠性和准确性。为了解决这个问题,最有效的方式就是手性分离氨基酸对映体。在众多分离的方法中,毛细管电泳(CapillaryElectrophoresis,CE)凭借其分离效率高,样品用量少和设备经济等优势被广泛的应用于氨基酸对映体的手性分离。为了减少手性分离的分析时间,提高DAAO酶分析效率,本论文主要进行了如下工作:(1)我们应用搭建的光漂白进样-激光诱导荧光检测毛细管电泳(OGCE-LIF)系统实现了氨基酸对映体的手性分离。为了提高手性分离的效率,我们对影响分离的实验条件进行了考察和优化,包括HP-β-CD的浓度,硼砂缓冲溶液的浓度,缓冲溶液的pH及分离电压等。在最优的OGCE-LIF分离条件下,实现五对OPA/NAC衍生的氨基酸对映体的高效分离,检出限达到1.3μM。该方法具有较高的重现性,15次重复分析的迁移时间的相对标准偏差低于1.5%,样品峰高的相对标准偏差低于2.7%。实验结果表明OGCE-LIF系统能够实现氨基酸对映体的高灵敏度,高重复性的快速分离,可以应用于手性氨基酸连续定量分析。(2)我们应用OGCE-LIF系统实现了DAAO对于单底物和多底物的酶反应分析,同时基于反应速率方程对DAAO平行氧化两种不同底物的催化反应进行了动力学分析,解释了实验测量结果。研究表明:在L型氨基酸大量存在时,OGCE-LIF系统可以实现对DAAO酶反应的高效分析,借助该系统快速手性分离多对氨基酸对映体的优势,可实现多底物DAAO催化反应研究,这对于复杂的生物样品中的D-AAs含量检测和DAAO酶反应分析提供了有利的途径。