【摘 要】
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以加工番茄育种材料B04的果实为材料,对PG基因片段进行了克隆,并构建了正义植物表达载体和反义植物表达载体。主要实验结果如下:(1)提取了B04加工番茄红熟果实总RNA,经过反转
【出 处】
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西北农林科技大学 西北农林科技大学
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以加工番茄育种材料B04的果实为材料,对PG基因片段进行了克隆,并构建了正义植物表达载体和反义植物表达载体。主要实验结果如下:(1)提取了B04加工番茄红熟果实总RNA,经过反转录PCR,扩增出一条697bp的目的片段。通过TA克隆,把它连接到pMD18-T vector上,获得重组子pMD18-T-PG,通过测序、分析,证明所克隆片段为PG基因的一部分。(2)重组质粒pMD18-T-PG经Sal I和Sma I双酶切,获得PG基因片段,定向插入到经同样双酶切的中间表达载体pBinAR CaMV 35S启动子和OCS终止子之间,构建成含有PG基因片段的反义植物表达载体pBinAR-aPG。(3)使用BamH I和Hinc II双酶切pMD18-T-PG,获得PG基因片段,借助两个平末端,与经过Sma I和BamH I先后酶切的中间表达载体pBinAR连接,构建成正义植物表达载体pBinAR-PG。(4)把两个表达载体pBinAR-aPG和pBinAR-PG通过冻融法分别导入农杆菌EHA105感受态,为进一步遗传转化作准备。
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