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研究背景:
视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)和多发性硬化(multiple sclerosis,MS)同属中枢神经系统自身免疫性疾病,两者具有不同的免疫病理特点。目前研究证实Th17在MS发病中具有重要作用,也是免疫治疗的靶点之一;调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)功能不足也参与了MS的发病。Th17、Treg及其分化过程中的重要细胞因子相互作用,在正常情况下达到平衡状态。而在体外实验及MS动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎中均提示炎症环境下这种平衡被打破(Th17/Treg失衡)。
急性期蛋白参与到炎症活动中,对单核细胞、粒细胞等促炎症细胞具有一定调节作用,但尚未明确急性期蛋白对Th17、Treg有无调节作用。
目前,国内外对MS的研究比较成熟,对NMO的研究随抗水通道蛋白4抗体的发现也有了飞跃,但对NMO和MS患者Th17、Treg的研究对比以及它们与临床病情的关系探讨尚存在空白。
研究目的:
1.了解NMO和MS患者急性期血清脂蛋白水平,探讨这些指标在两病之间的差异,以及与临床病情的联系。
2.测定NMO和MS患者急性期外周血CD4+T细胞Th17和Treg记忆性亚群比例,比较Th17、Treg的记忆性亚群比例在两病之间的差异,探讨Th17、Treg的记忆性与临床病情的联系,探讨急性期蛋白对Th17、Treg记忆性亚群的作用。
3.测定NMO和MS患者急性期外周血CD4+T细胞Th17和Treg比例、IL-23R表达率,以及Th17、Treg分化过程中的重要细胞因子(IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β)水平,比较Th17/Treg失衡在NMO和MS间的异同,探讨急性期蛋白在Th17/Treg失衡中的作用。
4.比较大剂量甲基泼尼松龙冲击治疗(high-dose intravenous methylprednisolone,IVMP)前后NMO、MS患者Th17、Treg亚群及细胞因子水平的变化,探讨IVMP对Th17、Treg及其记忆性亚群的作用,对Th17/Treg失衡的恢复作用。
方法:
1.临床资料搜集,包括病程、复发次数、EDSS评分、脊髓MRI节段、头颅MRI病灶数、急性期蛋白水平等。
2.间接免疫荧光法检测患者血清抗AQP4抗体。
3.流式细胞仪检测患者外周血CD4+T细胞Th17、Treg及其记忆性亚群比例,L-23R表达率。
4.ELISA法检测患者血清IL-6、LI-17A、IL-23水平,Flowcytomix技术检测患者血清TGF-β1水平。
5.数据资料使用SPSS13.0统计分析软件进行运算,利用各种参数对比,相关性分析等进行分析。
结果:
1.NMO患者apoB水平及apoB/apoA-1比值高于MS患者。HDL-C水平与NMO患者复发次数存在正相关关系,LDL-C水平与MS患者病程呈负相关。
2.NMO患者Th17、mTh17及emTh17比例高于MS患者及对照者。IVMP治疗后,NMO患者外周血Th17及其记忆性亚群比例均有明显下降,而MS患者外周血中只有Th17和mTh17比例下降。外周血Treg及mTreg比例在NMO、MS患者及对照者间的差异未显示出统计学意义。
3.NMO患者Th17、mTh17及emTh17比例均与EDSS评分呈正相关,MS患者中,emTh17比例与EDSS评分呈正相关。外周血cmTh17比例与所有患者复发次数呈正相关。
4.Th17比例、Th17/Treg比值,IL-23R表达率,血清IL-17A、IL-23水平呈NMO患者>MS患者>对照者变化,IVMP治疗后,以上指标均显著下降。TGF-β1在三组患者间并未显示出统计学差异,但在MS组治疗后浓度增高。
5.所有患者外周血Th17比例、Th17/Treg比值、血清IL-17A水平与EDSS评分呈正相关。血清IL-17A水平与外周血Th17比例呈正相关。在NMO患者中,外周血Th17比例、Th17/Treg比值及IL-17A水平与脊髓MRI病灶节段数呈正相关,TG、LDL-C水平与Th17/Treg比值呈正相关。在MS患者中,CRP水平与IL-23R表达率呈正相关。
结论:
1.apoB在鉴别NMO和MS方面具有一定价值,脂蛋白水平对临床病情有一定预测价值。
2.Th17及其记忆性亚群不仅是NMO和MS重要的病理因素,也是有一定临床预测价值。NMO和MS患者间emTh17和cmTh17对IVMP不同的反应性,可能是NMO和MS的又一个区别点。mTreg在NMO和MS中的作用可能是保护性的,但仍需要更进一步研究进行揭示。
3.NMO和MS患者均存在Th17/Treg失衡,其中以NMO患者的Th17/Treg失衡更为明显。Th17、IL-17在Th17/Treg失衡中起主要作用,对病情亦有指示作用,也是治疗的重要靶点。
4.IVMP治疗对Th17及其记忆性亚群、IL-17、IL-23等促炎症细胞、细胞因子具有抑制作用,通过此作用达到恢复Th17/Treg平衡,改善临床症状的目的,但对MS患者的Th17记忆性亚群抑制作用不明显,可能与患者今后的复发或进展有关。
5.TG、LDL-C、apoB、CRP等急性期蛋白可能具有促炎症作用,但有待更多的研究进行验证。