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该研究主要探讨小鼠胚胎干细胞培养的相关影响因素.小鼠胎儿成纤维细胞用5μg/ml的丝裂霉素处理4h,10μg/ml的丝裂霉素处理1~4h或20μg/ml的丝裂霉素处理1~2.5h,其随后培养2d-7d的A值无显著变化(p<0.05):用14、21、28GRAY的γ射线处理1h,其随后培养1-5d的A值亦无显著变化(p>0.05).在培养液中添加1,1.5,2×10<3>IU/ml的白血病抑制因子能显著提高小鼠胚胎干细胞的AKP染色阳性度(有饲养层培养:17.80±3.26、19.58±3.19、21.8±3.17 vs 2.73±0.22;p<0.05;无饲养层培养:14.14±2.35、17.87±2.38、19.21±2.92 vs 0.053±0.0125;p<0.05)及克隆形成率(有饲养层培养:29.1％、31.8%、33.5%vs6.9%;p<0.05;无饲养层培养:24.7%、27.8%、31.2%vs 05%;p<0.05);无论是否采用饲养层,不同浓度白血病抑制因子之间的AKP染色阳性度及克隆形成率差异不显著(p>0.05);而当不添加白血病抑制因子时,饲养层能显著地提高胚胎干细胞的AKP染色阳性度及克隆形成率(2.73±0.22 vs0.053±0.0125;6.9%vs 0.5%;p<0.05).胚胎干细胞在3种培养用水(Sigma细胞测定水、过亚沸Milli Q、Milli Q水)配制的培养基中培养5d,三种水的胚胎干细胞的克隆形成率无显著差异(p>0.05),但过亚沸Milli Q水的胚胎干细胞克隆AKP染色阳性度显著高于Milli Q水(16.35±2.21 vs 11.10±1.40;p<0.05),而与Sigma细胞测定水相比无显著差异(p>0.05).胚胎干细胞在4种血清(优质胎牛血清批次1、优质胎牛血清批次2、实验室自制的胎牛血清、商品新生牛血清)中培养5d,优质胎牛血清的克隆形成率和AKP染色阳性度均显著高于自制胎牛血清和商品新生牛血清(25.4%、24.5%vs 17.9%、16%,p<0.05;14.73±0.67、14.32±0.80 vs 11.76±0.55、10.59±1.09,p<0.05).以上结果表明:(1)小鼠胎儿成纤维细胞用适当浓度的的丝裂霉素或适当强度的γ-射线处理一定的时间能有效地抑制其分裂,且不影响其活力;(2)饲养层细胞在小鼠胚胎干细胞的分化抑制过程中有一定作用,而起主导作用的是外源白血病抑制因子;(3)经亚沸处理的Milli Q水,能显著提高小鼠胚胎干细胞保持未分化状态的能力;(4)血清的品质对小鼠胚胎干细胞的培养效果影响显著.