基于肠道微环境初步探讨肺系调治方作用机理的实验研究

来源 :云南中医学院 | 被引量 : 4次 | 上传用户:hyx19841101
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目的:本实验通过观察云南省名中医治疗小儿反复呼吸道感染的临床验方“肺系调治方”对模型大鼠肺和肠道菌群、黏膜免疫分子sIgA的调节,并分析其相关性,从肠道微环境的角度,初步阐明中医“肺系调治”的生物学基础。方法:1.分组:SPF级Wistar幼龄大鼠,雄性,体重100±10g,按照实验需要随机分为空白组、模型组、中药(高、中、低)浓度组和阳性药物组。2.建立菌群及免疫失调模型:通过腹腔注射头孢拉定、硫酸庆大霉素注射液和地塞米松注射的混合液的方法建立菌群及免疫失调大鼠模型,连续八天,每天一次。3.药物干预:中药低、中、高浓度组分别以肺系调治方低、中、高浓度灌胃给药;阳性对照组以灌胃方式给予泛福舒灌胃治疗,空白组和模型组以等量无菌蒸水灌胃。每天一次,连续七天。4.指标观测:观察大鼠行为学的变化;通过脱颈椎处死大鼠,取出脾脏和胸腺,并用分析天平称重,计算脏器指数;通过酶联免疫吸附试验检测大鼠肺和肠sIgA;通过气相色谱法检测大鼠肠道短链脂肪酸的含量;通过16S r DNA测序技术对大鼠肺和肠道菌群进行测序。结果:1.行为学变化模型组饮食减少,毛发失去光泽、倦怠蜷卧,畏寒,口唇发绀,出现稀便,粪便不成形,以及出现打喷嚏及口鼻分泌物增多等症状。阳性药物组与模型组相比,上述症状有明显缓解。中药高、中、低浓度组较模型组有缓解。2.胸腺和脾脏指数的变化模型组大鼠胸腺指数和脾脏指数明显下降,与空白组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。中药高浓度组胸腺和脾脏指数明显上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药中浓度组胸腺指数明显上升,差异有统计学意义(P<0.05),中药中浓度组脾脏指数呈上升趋势;中药低浓度组胸腺指数明显上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05),中药低浓度组脾脏指数呈上升趋势;阳性药物组胸腺和脾脏指数明显上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。3.肺和肠sIgA的变化模型组大鼠肺sIgA的表达水平明显下降,与空白组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。中药高浓度组肺sIgA明显上升,与模型组相比,统计学有显著差异(P<0.01);中药中浓度组肺sIgA明显上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药低浓度组肺sIgA呈上升趋势;阳性药物组肺sIgA明显上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。模型对照组大鼠肠sIgA明显下降,与空白组相比,差异有显著意义(P<0.01)。中药高浓度组肠sIgA明显上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);中药中浓度组上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);中药低浓度组上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);阳性药物组肠sIgA明显上升,与模型组相比,差异有显著意义(P<0.01)。4.肠道短链脂肪酸的变化与空白组相比,模型组大鼠肠道短链脂肪酸(乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸)呈下降趋势;与模型组相比,中药中浓度组和阳性药物组大鼠肠道短链脂肪酸呈上升趋势。5.肺和肠道菌群门和属水平的变化与空白组相比,模型组大鼠肠道菌群Firmicutes(厚壁菌门)和Proteobacteria(变形菌门)下降,Bacteroidetes(拟杆菌门)上升;RuminococcaceaeUCG-013上升,Desulfovibrio(脱硫弧菌属)、Ruminococcus1和Turicibacter下降。与模型组大鼠相比,中药中浓度组大鼠门水平Firmicutes(厚壁菌门)上升、Proteobacteria(变形菌门)变化不明显、Bacteroidetes(拟杆菌门)下降;RuminococcaceaeUCG-013下降,Desulfovibrio(脱硫弧菌属)、Ruminococcus1和Turicibacter上升。阳性药物组大鼠Firmicutes(厚壁菌门)下降、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Proteobacteria(变形菌门)上升;RuminococcaceaeUCG-013下降,Desulfovibrio(脱硫弧菌属)、Ruminococcus1和Turicibacter上升。与空白组大鼠相比,模型组大鼠肺部菌群Proteobacteria(变形菌门)和Bacteroidetes(拟杆菌门)下降、Firmicutes(厚壁菌门)上升,Pseudomonas(假单胞菌属)和Prevotella2下降;Ralstonia(雷尔氏菌属)和Blautia(布劳特氏菌属)上升。与模型组大鼠相比,中药中浓度组大鼠肺部菌群Proteobacteria(变形菌门)和Bacteroidetes(拟杆菌门)上升、Firmicutes(厚壁菌门)下降;Pseudomonas(假单胞菌属)和Prevotella2上升,Ralstonia(雷尔氏菌属)和Blautia(布劳特氏菌属)下降;阳性药物组大鼠Proteobacteria(变形菌门)和Bacteroidetes(拟杆菌门)上升、Firmicutes(厚壁菌门)下降,Pseudomonas(假单胞菌属)和Prevotella2上升;Ralstonia(雷尔氏菌属)和Blautia(布劳特氏菌属)下降。6.相关性分析短链脂肪酸与肺-肠黏膜免疫sIgA之间具有正相关的关系。p<sub>Firmicutes;g<sub>Lactobacillus(厚壁菌门,乳酸杆菌属)与短链脂肪酸和肺黏膜免疫sIgA呈负相关的关系,与肠黏膜免疫sIgA呈负相关的关系(P<0.05)。结论:1.肺系调治方对肺-肠菌群的多样性、优势菌均有调节作用;2.肺系调治方促进肺-肠黏膜免疫分子sIgA的分泌;3.肺系调治方通过对大鼠肠道菌群及黏膜免疫调节,改善肠道微环境平衡,进而促进呼吸道菌群平衡和黏膜免疫,是“肺系调治”的的生物学基础。
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