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第一部分切口痛大鼠脊髓TNF-α的变化目的观察切口疼痛模型中,大鼠疼痛行为学、痛阈和脊髓TNF-α的变化。方法健康成年雄性SD大鼠60只随机分为对照组(C组)和依那西普(E组),每组30只。戊巴比妥钠麻醉大鼠后,对大鼠左后爪足底实施手术刺激;然后对C组大鼠鞘内注射生理盐水10μl,对E组大鼠鞘内注射TNF-α拮抗剂依那西普100μ(g10μl)。按照手术切割刺激后-1(术前1h)、4、8、16和24h随机分配大鼠,每组每一时间点6只。用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用RT-PCR方法测定腰段脊髓TNF-αmRNA表达和用Western Blot方法测定脊髓TNF-α蛋白的表达。结果(1)手术后两组大鼠活动频繁,出现跛行、舔咬手术侧后肢足底等行为,左后爪常翘起,即使着地也极少负重,但依那西普组(E组)大鼠反应较对照组(C组)轻;术前(-1h观察时间点)两组大鼠累积疼痛评分(cumulative pain score, CPS)均为0,术后两组大鼠CPS均升高(P﹤0.01),E组术后各时间点CPS低于C组(P﹤0.01)。(2)术前(-1h观察时间点)两组大鼠机械性痛阈(HWMT)比较无明显差异(P﹥0.05),术后两组大鼠HWMT明显下降(P﹤0.01),均在术后8h时最低,术后各时间点E组大鼠HWMT明显高于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。(3)术前(-1h观察时间点)两组大鼠热痛阈(HWTL)比较无明显差异(P﹥0.05),术后两组大鼠HWTL明显下降(P﹤0.01),均在术后8h时最低,术后各时间点E组大鼠HWTL明显高于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。(4)术前(-1h观察时间点)两组大鼠脊髓中即有少量TNF-αmRNA表达,手术刺激后TNF-αmRNA表达上调(P﹤0.01),在术后8h达最高水平,术后各时间点E组大鼠脊髓TNF-αmRNA表达水平明显低于C组(P﹤0.01)。(5)术前(-1h观察时间点)两组大鼠脊髓中即有少量TNF-α表达,手术刺激后TNF-α表达上调(P﹤0.01),在术后8h达最高水平,术后各时间点E组大鼠脊髓TNF-α表达水平明显低于C组(P﹤0.01)。结论在大鼠切口疼痛模型中,手术刺激后,大鼠活动频繁,出现术侧足翘起、跛行、舔咬伤口等异常行为,CPS升高,机械性痛阈和热痛阈下降,这些异常表现在术后4～16h表现明显,与临床上手术后患者疼痛状态接近;手术后大鼠脊髓TNF-αmRNA和蛋白表达升高,在术后4～16h维持在较高水平,大鼠脊髓TNF-α参与了手术后疼痛的产生和维持。第二部分鞘内注射TNF-α对大鼠痛阈的影响目的观察鞘内注射不同剂量的TNF-α蛋白对大鼠机械痛阈和热痛阈的影响。方法健康成年雄性SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只。对照组(C组):鞘内注射生理盐水10μl;TNF-α1组(T1组):鞘内注射TNF-α1ng(10μl);TNF-α5组(T5组):鞘内注射TNF-α5ng(10μl);TNF-α10组(T10组):鞘内注射TNF-α10ng(10μl)。腹腔注射1%戊巴比妥钠40mg/㎏麻醉大鼠后,大鼠取俯卧位,垫高下腹部以充分显露大鼠腰椎间隙,用微量注射器(25μl)于L5～L6间隙直接穿刺注射给药(生理盐水和不同剂量的重组大鼠TNF-蛋白),鞘内注射后-1(鞘内注射前1h)、4、8、16和24h用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈。结果(1)四组大鼠鞘内注射前机械性痛阈比较无明显差异(P﹥0.05)。鞘内注射生理盐水后,对照组大鼠机械性痛阈无明显变化(P﹥0.05)。鞘内注射rrTNF-α后4～8h,试验组各组大鼠机械性痛阈下降(P﹤0.05或P﹤0.01);鞘内注射rrTNF-α后16h, TNF-α5组和TNF-α10组大鼠机械性痛阈下降(P﹤0.05或P﹤0.01);鞘内注射rrTNF-α后24h, TNF-α10组大鼠机械性痛阈下降(P﹤0.05)。(2)四组大鼠鞘内注射前热痛阈比较无明显差异(P﹥0.05)。鞘内注射生理盐水后,对照组大鼠热痛阈无明显变化(P﹥0.05)。鞘内注射rrTNF-α后4～16h,试验组各组大鼠热痛阈下降(P﹤0.05或P﹤0.01);鞘内注射rrTNF-α后24h, TNF-α10组大鼠热痛阈下降(P﹤0.05)。结论鞘内注射TNF-α可导致中枢痛觉过敏,使大鼠机械性痛阈和热痛阈降低,随着注射剂量增加,机械痛阈和热痛阈下降幅度增加并且维持时间延长。第三部分切口痛大鼠脊髓磷酸化p38MAPK的变化目的观察切口疼痛模型中,大鼠疼痛行为学、痛阈和脊髓p38MAPK的变化。方法健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为三组:对照组(C组)、二甲基亚砜组(D组)和SB203580组(S组),每组30只。戊巴比妥钠麻醉大鼠后,在大鼠左后爪足底实施手术刺激;然后对C组大鼠鞘内注射生理盐水10μl,对D组大鼠鞘内注射2%二甲基亚砜10μl,对S组大鼠鞘内注射p38MAPK特异性抑制剂SB203580(溶于2%二甲基亚砜)10μg(10μl)。按照手术切割刺激后-1、4、8、16和24h时间点随机分配大鼠,每组每一时间点6只。手术切割刺激后-1(术前1h)、4、8、16和24h观察大鼠行为学变化;用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用Western Blot方法测定脊髓p38MAPK和磷酸化p38MAPK的表达。结果(1)手术后三组大鼠活动频繁,出现跛行、舔咬左后爪足底等行为,左后爪常翘起,即使着地也极少负重,对照组(C组)和二甲基亚砜组(D组)大鼠表现无差异,SB203580组(S组)大鼠轻于C组和D组大鼠。三组大鼠术前(-1h)累积疼痛评分(CPS)均为0,手术后三组大鼠CPS升高(P﹤0.01),C组和D组大鼠CPS无明显差异(P﹥0.05),S组大鼠CPS低于C组和D组(P﹤0.01),三组大鼠CPS均在术后8h时最高。(2)三组大鼠术前(-1h观察时间点)机械性痛阈(HWMT)比较无明显差异(P﹥0.05)。手术后三组大鼠HWMT均下降(P﹤0.01),C组和D组大鼠HWMT无明显差异(P﹥0.05),S组大鼠HWMT高于C组和D组(P﹤0.01),三组大鼠HWMT均在术后8h时最低。(3)三组大鼠术前(-1h)热痛阈(HWTL)比较无明显差异(P﹥0.05)。手术后三组大鼠HWTL均下降(P﹤0.01),C组和D组大鼠HWTL无明显差异(P﹥0.05),S组大鼠HWTL高于C组和D组(P﹤0.01),三组大鼠HWTL均在术后8h时最低。(4)三组大鼠术前(-1h观察时间点)脊髓中p38MAPK有一定程度的表达,P-p38MAPK几乎检测不到。手术后三组大鼠p38MAPK无明显变化(P﹥0.05);P-p38MAPK表达水平上升,C组和D组大鼠CPS无明显差异(P﹥0.05),S组大鼠低于C组和D组(P﹤0.01),三组大鼠均在术后8h时最高(P﹤0.01)。结论在大鼠切口疼痛模型中,手术刺激后,大鼠活动频繁,出现术侧足翘起、跛行、舔咬伤口等异常行为,累积疼痛评分升高,机械性痛阈和热痛阈下降,这些异常表现在术后4～16h表现明显,与临床上手术后患者疼痛状态接近;手术后大鼠脊髓p38MAPK磷酸化水平升高,在术后8h达最高水平,大鼠脊髓p38MAPK信号传递途径参与了手术后疼痛的产生和维持。第四部分鞘内注射沙利度胺和SB203580对切口痛大鼠的影响目的观察鞘内注射沙利度胺和SB203580后,切口痛大鼠行为学、疼痛阈值和脊髓TNF-α、p38MAPK及磷酸化p38MAPK的变化。方法90只健康成年雄性SD大鼠,随机分为三组:对照组(C组)、沙利度胺组(T组)和SB203580组(S组),每组30只。戊巴比妥钠麻醉大鼠后,对大鼠左后爪足底实施手术刺激。术后C组大鼠鞘内注射生理盐水10μl,T组鞘内注射沙利度胺100μg(10μl),S组鞘内注射SB203580(溶于2%二甲基亚砜)10μg(10μl)。按照术后-1(术前1h)4、8、16和24h随机分配大鼠,每组每一时间点6只。在上述时间点观察每组大鼠行为学变化;用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用RT-PCR方法测定腰段脊髓TNF-αmRNA表达和用Western Blot方法测定脊髓TNF-α蛋白、p38MAPK及P-p38MAPK的表达。结果(1)三组大鼠术前活动无异常,术后活动频繁,出现跛行、舔咬手术切口等行为,C组大鼠表现更明显。三组大鼠术前(-1h时间点)累积疼痛评分(CPS)均为0,术后三组大鼠CPS升高(P﹤0.01),术后8h最高;术后各时间点比较, T组和S组CPS均低于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。(2)三组大鼠术前(-1h时间点)机械性痛阈(HWMT)比较无明显差异(P﹥0.05)。术后各组大鼠HWMT下降(P﹤0.01),但T组和S组在术后各时间点均高于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。(3)三组大鼠术前(-1h时间点)热痛阈(HWTL)比较无明显差异(P﹥0.05)。术后各组大鼠HWTL下降(P﹤0.01),但T组和S组在术后各时间点均高于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。(4)三组大鼠术前腰段脊髓TNF-αmRNA均有微量表达,组间比较无明显差异(P﹥0.05)。术后各组大鼠腰段脊髓TNF-αmRNA表达上调(P﹤0.01),但T组和S组均低于C组(P﹤0.01)。(5)三组大鼠术前腰段脊髓TNF-α蛋白均有微量表达,组间比较无明显差异(P﹥0.05)。术后各组大鼠腰段脊髓TNF-α蛋白表达上调(P﹤0.01),但T组和S组均低于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。(6)术前三组大鼠脊髓中p38MAPK均有一定程度的表达,组间比较无明显差异(P﹥0.05),术后各时间点p38MAPK表达无明显变化(P﹥0.05)。术前三组大鼠脊髓中磷酸化p38MAPK几乎检测不到,术后磷酸化p38MAPK水平上升(P﹤0.01),但T组和S组在术后各时间点均低于C组(P﹤0.05或P﹤0.01)。结论大鼠脊髓TNF-α和P-p38MAPK表达上调,两者相互促进对方的表达,形成一个正反馈循环,共同参与了手术后疼痛的产生和维持。