本课题以仿刺参肠道组织为原料,首先对其营养成分进行测定,继而选用单因素法及响应面法对木瓜、风味还有复合蛋白酶这三种蛋白酶进行酶解工艺优化。对得到的不同分子量肽段的梯级肽进行化学抗氧化性研究及细胞损伤保护作用,最后以得率和活性为目的分离纯化多肽。主要研究内容如下:1.仿刺参肠道组织基本营养成分的测定仿刺参肠道组织作为海参加工过程中的副产品,蛋白含量丰富,其粗蛋白含量达到63.056g/100g。可作为制备多肽的原材料。2.仿刺参肠道组织酶解工艺条件优化首先综合考虑生产可行性、产品安全性、产品风味鲜香等因素,筛选蛋白酶的种类,以酶解时间、酶解温度及加酶量三个因素对酶解条件进行优化,利用响应面法确定最佳酶解工艺条件。最后以木瓜蛋白酶在温度50.10℃、时间2.84h、加酶量2.639万U条件下实际水解度达到41.82%。本实验采用的三种外源中性蛋白酶,结合仿刺参肠道组织中自身溶解酶,形成的多酶体系,结果表明其酶解工艺条件优化合理有效,在安全的基础上不仅提高了水解度,而且得到了颜色鲜亮状态澄清均匀且风味鲜香浓郁的酶解液,其可利用作为开发风味独特的功能性食品。3.梯级肽的分离制备及活性研究本实验通过优化超滤的步骤,采用梯度稀释法,木瓜蛋白酶为活性酶,分离仿刺参肠道组织的酶解液。结果表明经过四次超滤,小于该膜包的多肽已基本滤过完全,达到了分离纯化的目的。实验共得到四个分子量大小范围的多肽,即小于650、650~1 000、1 000~10 000及大于10 000 u这4个肽段的多肽,命名为T3、T2、T1、T0,其含量分别为95.32%、2.57%、1.70%、0.41%。在对T1、T2、T3的化学抗氧化性的测定中,结果显示:T1、T2、T3都具备非常不错的清除DPPH自由基,抗超氧阴离子以及清除羟自由基的能力,且在一定范围内,样品的清除即抗化学氧化能力的大小与浓度呈正相干。其中,T3清除DPPH自由基及抗超氧阴离子能力优于T1及T2,而抗羟基自由基能力T3与T2的抑制能力相当并高于T1。对分离得到的仿刺参梯级肽进行原代巨噬细胞或氧化氢损伤保护能力检测,通过过建立H2O2损伤原代巨噬细胞模型,选取H2O2的浓度为160μmol/L,利用MTT法检测各肽段样品对原代巨噬细胞的H2O2损伤保护作用,其结果表明,各肽段样品均具有明显的细胞损伤保护能力,其中T3肽段保护效果更佳。4.仿刺参肠道组织多肽纯化及分析本实验利用大孔吸附树脂层析法,对超滤所得到的T3肽段进行的进纯化分离,并对分离的组分进行抗氧化性检测,测定其分别清除DPPH自由基和超氧阴离子的能力。T3大孔吸附树脂层析分离所得5个成分即F1、F2、F3、F4和F5,含量分别为5.657%、29.032%、16.543%、32.862%、15.682%,通过测定清除自由基能力及得率综合分析,选用F2作为进一步分离纯化。本实验通过高速逆流色谱,对大孔吸附树脂分离所得的F2组分进行进一步的分离纯化,用于高速逆流色谱的各个溶剂,甲基叔丁基醚:正丁醇:乙腈:1%三氟乙酸=2:1:1:5,F2肽段分离出的的各个峰,命名为F2-1、F2-2、F2-3、F2-4,含量分别为52.448%、15.233%、9.348%、15.035%。测定4个组分的抗化学氧化能力,F2-1呈现出明显的清除含羟基自由基的能力,而F2-4的拮抗超氧阴离子的能力较强。