目的：支气管哮喘是一种呼吸系统的常见疾病，近年来其发病率、死亡率逐年增高。研究表明，Th1/Th2平衡失调是哮喘发病的重要免疫学机制。主要表现为Th2细胞数目增多、功能亢进。因此研究如何促进Th0细胞向Th1细胞分化，抑制Th2型细胞因子的产生从而控制哮喘变态反应发生和发展成为人们普遍关注的热点。然而直接将Th2型细胞因子拮抗剂或Th1型细胞因子用于哮喘防治，均因作用过于单一，效果都不尽如人意。可见，对于哮喘这样一种由多种炎性介质和细胞因子共同参与的疾病，单纯阻断一种细胞因子难以对整个免疫网络造成根本性的影响。所以最好能针对哮喘免疫发生机制找到能改善整个Th1/Th2失衡状态的免疫调节物就成为哮喘防治的希望所在。DNA疫苗作为近年发展起来的一种新型疫苗，已经在艾滋病、乙型肝炎等疾病的免疫防治中取得了初步成效，并且在哮喘的预防中也进行了有益的探索。 在本研究小组以前的实验中，HSP70/CD80嵌合DNA疫苗在小鼠结核病的防治中显示了明显免疫预防及治疗作用，该嵌合疫苗对结核杆菌生长有很强的抑制作用，小鼠IFN—γ明显增高。结核杆菌HSP70与人CD80蛋白都不是结核杆菌的特异抗原，对小鼠结核的防治作用说明其机制可能是通过诱导IFN—γ分泌增多，加强Th1型反应，并抑制Th2反应，达到机体的免疫平衡状态并发挥对结核杆菌的抑制和杀灭作用。基于上述实验结果，我们认为HSP70／CD80嵌合疫苗对Th1/Th2平衡的调节作用也可应用于其它免疫失衡的疾病，作为一种广谱疫苗用于多种疾病的防治。在本研究中，我们以鸡卵清蛋白（ovalbumin，OVA）致敏的小鼠为模型，观察HSP70/CD80嵌合疫苗对哮喘小鼠气道炎症反应和气道高反应性（hyperresponsiveness，AHR）的影响，为临床哮喘病及其它变应性疾病的防治提供实验依据，以期获得免疫原性强、安全可靠的新型免疫调节性疫苗。 方法：1．HSP70/CD80嵌合DNA真核表达质粒用PCR方法进行鉴定。按照QIAGEN公司去内毒素级质粒大量抽提试剂盒说明书制备pcDNA3．1质粒和HSP70/CD80嵌合质粒。核酸定量仪测定所提质粒含量和纯度，将质粒溶于注射用水调整浓度至1 mg／ml。2．将40只雌性健康BALB/c小鼠随机分为4组：对照组、哮喘组、pcDNA3．1载体组和HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组，每组10只。将质粒分别给载体组和疫苗组小鼠注射后，用OVA致敏小鼠。哮喘组用OVA致敏建立哮喘模型，对照组用生理盐水代替。最后一次OVA激发后24 h，通过全身体积描记仪检测吸入乙酰甲胆碱检测小鼠气道反应性，以Penh（enhanced pause）较基线增高的倍数来反映支气管反应性的高低。用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中γ—干扰素（interferon—γ，IFN—γ）、白细胞介素—13（interleukin—13，IL—13）和前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）含量的变化，常规苏木素—伊红（Hematoxylin—eosin，HE）染色观察小鼠肺内炎症情况，并对肺组织炎症细胞浸润评分。过碘雪夫酸（periodic acid—Schiff，PAS）染色观察杯状细胞增生和黏液分泌情况。 结果：1．以HSP70/CD80嵌合DNA质粒为模板，p1、p2为引物扩增出1900bp的HSP70基因片断；p3、p4为引物扩增出900bp的CD80基因片断；p5、p6为引物扩增出包括45bp的Linker基因片断。表明HSP70/CD80嵌合DNA质粒与预期结果相符。2．给予不同浓度乙酰甲胆碱刺激后，哮喘组和载体组小鼠的气道反应性较对照组明显增高，在乙酰甲胆碱浓度达6 mg／ml后，哮喘组、载体组小鼠较对照组小鼠开始有明显差异（P<0．05）；在乙酰甲胆碱浓度达12 mg/ml后，疫苗组小鼠较哮喘组开始有明显差异（P<0．05）。3．与对照组比较，哮喘组和载体组BALF中INF—γ和PGE2的分泌减少，差异有统计学意义（P<0．05）；与哮喘组相比，HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组能增加BALF中INF—γ和PGE2含量，差异有统计学意义（P<0．05）。4．与对照组比较，哮喘组和载体组的支气管和小血管周围甚至肺泡有大量炎细胞浸润，以嗜酸粒细胞和单核细胞为主，差异有统计学意义（P<0．05）；与哮喘组相比，疫苗组能有效抑制气道、肺泡和血管周围的炎症细胞浸润，差异有统计学意义（P<0．05）。5．哮喘组和载体组气道上皮中杯状细胞增生，PAS着色细胞明显增加，管腔中有黏液渗出；对照组和疫苗组PAS着色细胞及管腔内的黏液分泌物明显减少。 结论：1．经PCR扩增鉴定HSP70/CD80嵌合DNA质粒与预期相符，为进一步研究HSP70/CD80嵌合质粒在动物体内的免疫学效应奠定了基础。2．HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可促进免疫反应向Th1偏移，IFN—γ生成明显增高。该疫苗使用的最终结果是减轻气道炎症、降低气道阻力。其机制可能是IFN—γ作用于有关信号转导通路，某些介质（如具抗炎和气道扩张作用的PGE2）的参与，使HSP70/CD80嵌合DNA起到了防治小鼠过敏性哮喘的作用。