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近年来,国内外由食品安全引发的问题屡见报道,人们越来越多的重视食品安全。但是受到利益的驱使,但是仍然存在不法分子在食品中滥用非法添加剂,致使人民身体健康受到威胁。为了有效的保证食品安全,开发药物残留快速便捷的检测方法显得尤为重要。群勃龙(Trenbolone, TRE)是一种应用广泛的甾类蛋白同化激素,它是在结构及活性上与人体雄性激素睾酮相似的化学合成衍生物。它能促进蛋白质合成、增进食欲、增长肌肉、促进钙磷在骨组织中沉着,临床上可用于治疗严重的营养缺乏和骨质疏松症等疾病,但它同时也是使用频率最高的一类运动兴奋剂[1]。此外,在畜牧生产上,群勃龙在对动物疾病控制和治疗上起到重要的作用。但是需要注意的是,群勃龙有严重的副作用,比如可以引起失眠症,高血压,夜间盗汗等症状。基于以上缺点,在许多国家和地区群勃龙的使用都被严格控制。但是受到利益的驱使,群勃龙仍然被非法使用。所以开发一个简便,快速,灵敏的用于检测动物组织和饲料中的群勃龙残留的方法就显得极为重要。目前群勃龙的药物残留检测方法主要包括理化方法和免疫分析法等。理化方法有HPLC、GC-MS、LC、LC-MS等。此类方法稳定、准确,可以作为标准方法,但是仪器设备昂贵,笨重,样品前处理复杂,不适合大规模样品的即时检测。免疫分析法中最常见的是酶联免疫方法,此方法克服了以上缺点,是一种易于操作的,低成本,高效快速,准确的检测手段。具有非常高的应用价值和使用前景。本文旨在建立动物饲料,组织及尿液中群勃龙药物残留的酶联免疫检测法(ELISA)。实验中采用琥珀酸酐法合成群勃龙半抗原,然后采用碳二亚胺法将群勃龙半抗原偶联到载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和血蓝蛋白(KLH)上,制备包被抗原和免疫原。免疫小白鼠后,获得了针对半抗原的高特异性单克隆抗体,并据此建立了群勃龙药物的酶联免疫快速检测法(ELISA)。检测结果如下：IC500.323ng/mL,检测限为0.06ng/mL。同时实验结果显示该抗体对其他六种相似结构的药物交叉率很小,具有很高的特异性。另外,对动物组织,尿液和饲料三种实际体系的添加回收率在82.0-83.4%,81.3-89.4%,82.7-87.2%。批内变异系数分别为5.8-12.8%,9.3-16.2%,9.1-11.2%,批间变异系数分别为10.1%,11.7%,10.1%。克伦特罗,莱克多巴胺和沙丁胺醇属于β-兴奋剂类药物。β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似β-肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物。它们既可以作为兽药治疗家畜疾病,还可以作为饲料添加剂加快畜禽生长,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率。但是,研究表明β-兴奋剂能够在动物体内中积聚残留。如果人长期食用含有此药物残留的动物性食品,就会对人肝、肾等内脏器官造成严重的损害。因此世界上许多国家和地区都严禁在畜牧业生产上使用各种β-兴奋剂类药物。但是由于利益的驱使,此类药物非法使用的情况仍时有发生。因此,研究该类药物的残留检测技术迫在眉睫。目前,用于此类β-兴奋剂残留检测的方法主要有免疫分析法,HPLC,LC-MS, GC-MS等。在这些方法的样品前处理方法中大多数采用传统的SPE技术。但是值得注意的是传统的SPE技术步骤较为繁琐,而且多用到大量的有机试剂,所以方法亟待改进。本文旨在制备一种能够同时分离富集克伦特罗,莱克多巴胺和沙丁胺醇三种药物的免疫亲和柱(IAC)。利用共价键和的方法将沙丁胺醇抗体、莱克多巴胺抗体与琼脂糖凝胶4B结合,然后装柱制得免疫亲和柱。相对于SPE技术,此亲和柱具备特异性,高效性以及能够显著降低基质效应等特点。除此之外,与HPLC-UV-FLD联用实现了对克伦特罗,莱克多巴胺和沙丁胺醇三种药物残留的同时检测。实验结果如下：抗体与琼脂糖凝胶4B的偶联率为88.6%,对三种药物的柱容量分别为275,232,514 ng。另外,应用免疫亲和柱还成功地分离提纯了猪肉,猪肝,猪饲料三种实际体系中的克伦特罗,莱克多巴胺和沙丁胺醇,添加回收率为78.3-95.9%,变异系数为1.3%-5.0%。通过本课题的研究,成功合成了群勃龙的免疫原和包被抗原,并通过免疫生物学的方法制得了群勃龙的单克隆抗体。基于此抗体建立了群勃龙的酶联免疫方法。此外还成功制备了一种能够同时分离富集克伦特罗,莱克多巴胺和沙丁胺醇三种药物的免疫亲和柱,并与HPLC-UV-FLD联用实现了对三种药物残留的同时检测。为食品安全检测提供了新的方法和思路。