目的:采用多瘤病毒中间T抗原(Polyoma virus middle T antigen,PyMT)过表达的慢病毒感染雌性C57BL/6小鼠乳腺上皮细胞,构建C57BL/6乳腺癌模型,并分析肿瘤组织的病理学特点、分子分型等生物学特性。方法:通过将PyMT过表达质粒与慢病毒包装质粒MDL、REV和VSVG共转染HEK293T细胞进行慢病毒包装,病毒液浓缩后,采用乳腺导管注射方法,将病毒液注射入雌性C57BL/6小鼠的乳腺导管中,定期观察小鼠肿瘤发生情况,记录肿瘤生长情况;肿瘤长径达到1.5厘米后,取肿瘤和肺组织切片进行HE染色,观察肿瘤类型、生长特点和转移情况;肿瘤组织冰冻切片,免疫荧光检测GFP和CK14的共定位情况,免疫组织化学检测肿瘤组织ERα,PR,HER2,Ki67,CK5和α-SMA表达,确认肿瘤的分子分型;提取肿瘤组织蛋白,检测PI3K/AKT、MAPK/ERK、JAK/STAT3信号通路的激活情况,以及与增殖、抗凋亡相关分子c-MYC、CyclinD1、Bcl-2、Bcl-xl的表达;当肿瘤体积达到150 mm~3左右时,对小鼠进行腹腔注射化疗药物阿霉素或生理盐水,观察肿瘤对阿霉素的敏感性。结果:1.在慢病毒注射后4周,小鼠乳腺区域触摸到微小凸起,随着时间的延长,肿块的体积逐渐增大,产生肿块的小鼠数量逐渐增多,在12周的观察期内,转基因鼠的成瘤率为100%,野生型小鼠为75%。2.组织冰冻切片免疫荧光结果显示,表达GFP荧光的PyMT与乳腺上皮细胞标志物CK14存在共定位现象。3.HE结果显示,PyMT诱导的乳腺癌病理学类型为乳头状癌,在12周的观察期内未发现肺转移;免疫组织化学结果显示,肿瘤组织伴有CK5的缺失和α-SMA的阳性表达,表明肿瘤局限于导管内未突破肌层;同时,ERα,PR,HER2和Ki67的表达在不同小鼠间呈现不均一性;免疫印迹结果显示,肿瘤组织伴有不同程度PI3K/AKT,MAPK/ERK,JAK/STAT3信号通路的激活以及增殖、抗凋亡相关分子c-MYC,CyclinD1,Bcl-2,Bcl-xl的高表达。4.药物试验结果显示,PyMT诱导的乳腺癌对阿霉素有较好的反应性,阿霉素能够显著抑制肿瘤的生长。结论:通过乳腺导管注射PyMT过表达慢病毒,在注射慢病毒液4周后,成功地在C57BL/6小鼠体内诱发了乳腺乳头状癌,成瘤率为70%,并且肿瘤呈现出致癌信号通路的激活和促增殖、抗凋亡蛋白的高表达,对化疗药物阿霉素有较好的反应性。