RNAi沉默STAT1对支气管哮喘小鼠气道炎症的调控作用研究

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目的:信号转导和转录激活因子1 (STAT1)参与IFN(干扰素)的信号转导过程,是STAT家族中第一个被发现的转录因子,它在先天性免疫中是必需的。IFN-y、IL-4等完成细胞因子介导的信号转导过程是通过JAK/STAT途径激活STAT1而诱导目的基因表达,从而导致哮喘患者气道的炎症和高反应性。本实验用特异性STAT1 siRNA (small interfering RNA)滴鼻沉默支气管哮喘小鼠气道上皮细胞STAT1后,检测其肺组织STAT1的表达水平及炎症细胞数量,探讨STAT1特异性siRNA对支气管哮喘小鼠气道炎症的调控作用,为基因治疗支气管哮喘等炎症性疾病奠定基础。方法:24只BALB/c小鼠随机平均分为PBS组、PG-HK(随机片段RNAi)组和STAT1(pGSTAT1-2)组。用新鲜配制的OVA/Al(OH)3混悬液(100mgOVA和100mgAl(OH)3干粉加入lml生理盐水制成),分别于第1天和第14天腹腔注射致敏,用已构建好的STAT1 siRNA于第26-29天滴入STAT1组,另2组分别用等容量的PBS液体,随机片段RNAi滴鼻,在第28-30天用OVA溶液滴鼻激发哮喘,末次滴鼻后12小时处死小鼠留取支气管肺泡灌洗液(BALF)计数浸润的炎症细胞数,检测其中的γ干扰素(IFN-y),白细胞介素4(IL-4)水平,肺组织切片做免疫组织化学染色、PAS(过碘雪夫酸)染色及HE染色。采用SPSS13.0软件进行单因素方差分析和随机区组设计的方差分析,多个样本均数之间的多重比较用LSD法,以P<0.05表示有统计学意义。同时分析BALF中炎症细胞数与IFN-y, IL-4间相关性。结果:实验结果表明STAT1 siRNA能减轻哮喘小鼠气道中以嗜酸性细胞为主的炎症细胞浸润,STAT1组白细胞总数,嗜酸性粒细胞(EOS)以及淋巴细胞(LC)数量较另两组少,它们之间的差异有统计学意义(P<0.01); ELISA法分别检测各组的支气管肺泡灌洗液中IFN-y,可见STAT1组高于PBS组和PG-HK组,而IL-4则低于另俩组,它们之间比较(P<0.01)差异有统计学意义;用免疫组化方法测各组肺组织中STAT1蛋白表达,发现STAT1组减少有统计学意义。结论:1. STAT1特异性RNA干扰重组体能够高效转染哮喘小鼠气道上皮细胞。2. STAT1特异性siRNA可抑制哮喘小鼠气道上皮细胞中STAT1的表达。3. STAT1特异性siRNA转染哮喘小鼠后,能使其气道炎症减轻。
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