狂犬病是一种由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引发的人畜共患烈性传染病。人和动物一旦感染后发病,死亡率几乎是100%。据世界卫生组织（WHO）统计分析,全球每年至少有59000人死于狂犬病,严重威胁超过150个国家和地区超过三亿人的生命安全。发展中国家是爆发狂犬病的高危区,我国狂犬病死亡人数位居世界第二位,仅次于印度。目前,对RABV致病机制的研究仍然不够完善,RABV致病机制的研究将有利于控制或消除人类狂犬病。本研究建立了RABV中强毒B2C株小鼠感染模型,利用同位素标记相对和绝对定量技术（iTRAQ技术）检测机体感染B2C后蛋白因子的表达差异情况。将上调蛋白-免疫相关的 GTPasea6 亚型（Immunity-related GTPase,Irga6 或IIGP1）基因插入RABV B2C基因组中,利用反向遗传操作技术,构建表达IIGP1的重组RABV（B2C-IIGP1）。间接免疫荧光（IFA）和蛋白免疫印迹（Western blotting）结果表明,B2C-IIGP1成功表达IIGP1。分别在免疫力依次增强的NA、U251、BV2细胞上测定重组病毒的多步生长曲线,结果发现,IIGP1能够抑制RABV的增殖。为探究对RABV的抑制是否与IIGP1的GTPase活性有关,将IIGP1中与GTPase活性相关的关键性位点进行突变,构建表达GTPase活性缺失的IIGP1真核表达质粒。将这些质粒在293T细胞过表达后,感染B2C病毒,检测培养基上清病毒滴度及细胞中RABV各蛋白表达水平,结果发现,106位氨基酸发生突变后,病毒滴度和RABV N蛋白表达水平恢复。通过ELISA检测GTPase活性,结果发现突变106位氨基酸发生后,IIGP1的GTPase活性降低;以上结果表明IIGP1的GTPase活性影响了RABV的增殖。为了探究IIGP1其它抑制RABV增殖的机制,在293T细胞中梯度表达IIGP1并感染B2C后,病毒滴度与RABVN蛋白和P蛋白随IIGP1表达的增加而减少,但G蛋白的表达量却没有变化。分别将表达RABV N蛋白、G蛋白和IIGP1的真核表达质粒共转染293T细胞,Western blotting和激光共聚焦结果发现,N蛋白没有随IIGP1的增加而发生变化,而G蛋白的表达量随着IIGP1的增加而增加,且主要集中在细胞质中。结果表明,IIGP1影响了 G蛋白在胞质内的表达。下一步进行体内验证IIGP1对RABV的抑制作用。分别通过耳根部皮下注射（6×103FFU）、鼻粘膜滴鼻（100 FFU）和后腿肌肉注射（6×104 FFU）对小鼠进行免疫。结果发现,在这三种免疫方式下,与亲本病毒B2C相比,过表达IIGP1降低了小鼠的死亡率,尤其是通过耳根部皮下注射和鼻粘膜滴鼻方式。在鼻粘膜滴鼻免疫方式下,分别在第6、9、12 d取小鼠大脑,分别检测不同脑区的病毒载量,结果发现在嗅球、海马、大脑皮层和脑干,与亲本病毒相比,B2C-IIGP1的病毒载量明显减少。最后,该研究证实IIGP1通过其GTPase活性及限制RABV G蛋白的出膜抑制了 RABV的增殖,该机制是机体抵御RABV入侵的一种全新机制,为狂犬病的治疗提供了一个潜在靶标。