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金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)引起的奶牛乳房炎是牛场发病最频繁的传染病之一，防治最为困难且易复发，给奶牛养殖业造成巨额损失，还对人类的健康存在巨大威胁。黏附素分子ClfA、EfB及FnBPA等是该菌感染初期的关键要素。EsxA作为S.aureus重要外分泌蛋白，可参与该菌免疫逃逸和诱导上皮细胞的凋亡。本研究比较了该菌不同黏附分子ClfA、EfB及FnBPA的抗体对该菌与牛乳腺上皮细胞黏附抑制作用的影响，还对EsxA基因进行了重组表达，并在小鼠水平对其进行免疫生物学特性的研究。 本研究应用组织块种植法和胰酶消化法分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定；将构建的真核重组质粒EfB和FnBPA分别与ClfA组合免疫新西兰大白兔并检测免疫后抗体水平；利用该抗体体外抑制2株S.aureus分离株侵染牛乳腺上皮细胞，采用平板计数法定量检测与比较不同免疫组合诱导抗体对黏附的抑制作用；对S.aureus和牛乳腺上皮细胞分别进行荧光染色，用荧光显微镜观察不同免疫组合诱导的抗体对黏附抑制效果的差异。结果表明，本研究成功分离培养了牛乳腺原代上皮细胞；证明了构建的ClfA、FnBPA和EfB真核重组表达质粒均可在细胞中表达，且在免疫实验兔后可诱导特异性抗体的产生；细菌平板计数和荧光染色观察的结果表明，黏附素分子单独和组合免疫抗体对该菌不同菌株(GY278和GY309)的黏附抑制能力不同，ClfA抗体的黏附抑制能力最强，FnBPA分子A区的黏附抑制能力优于D区。FnBPA、EfB分别与ClfA联合免疫后抗体对黏附的抑制程度高于黏附素分子单独免疫组，FnBPA分子A区在联合免疫时对ClfA黏附抑制的增强作用优于D区，FnBPA分子A区与EfB相比对ClfA的黏附抑制增强作用程度差异不显著。结论：FnBPA-A，FnBPA-D和EfB分别与ClfA联合免疫可不同程度的影响ClfA的黏附抑制效果，该结果为以黏附素分子为靶点的牛乳腺炎疫苗的研究提供了基础实验数据。 本研究扩增得到EsxA基因，构建了EsxA基因的原核表达质粒pET28a-EsxA。该重组表达质粒诱导后，经SDS-PAGE电泳及Westernblot检测，亲和纯化的重组蛋白免疫小鼠，对免疫小鼠进行免疫应答，免疫保护和病理组织学检测。结果表明，成功构建了原核表达载体pET-28a-EsxA，转化后经诱导可表达目的蛋白。重组蛋白免疫小鼠后血清抗体效价可达1∶2700，该重组蛋白对小鼠的攻击保护率达75%。经菌体载量计数结果和病理切片观察结果表明各免疫组小鼠脏器内的细菌载量均显著低于对照组，EsxA+ClfA联合免疫对于减少肝脾肾组织的菌体载量和减轻这些脏器的病理损伤具有增强和改善效果，该研究为进一步开展S.aureus性乳房炎的疫苗的研究奠定了实验基础。