活性氧对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱研究

来源 :昆明医学院 昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:siyu321
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[目的]探讨活性氧(ROS)对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱。[方法]体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),实验分AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组。采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察不同浓度AngⅡ在4h、12h和24h时对ECV304细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH和NO)的量。应用基因芯片技术和光镜分别检测0.0625和1μmol/L AngⅡ作用12h时ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱和细胞形态学变化。[结果]实验结果发现:①一定浓度的Ang Ⅱ(0.03125—1μmol/L)作用12h时ECV304细胞增殖率增加,明显高于NAC干预组和正常对照组(P<0.05),0.0625μmol/LAng Ⅱ对细胞增殖作用最为显著。10mmol/L NAC可抑制1μmol/L Ang Ⅱ对ECV304细胞的增殖作用,与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05),Ang Ⅱ作用24h时,随浓度增加,ECV304细胞出现负增殖;②统计学相关分析显示,ROS(·OH)的含量与ECV304细胞增殖率呈显著负相关(r=-0.8,P<0.01);③基因芯片技术分析显示,在0.0625μmol/L Ang Ⅱ作用ECV304细胞12h时,与细胞增殖相关的ERK、CDK、CCN、PCNA等25个基因普遍上调,而与细胞凋亡相关的DR6、Caspases6、BAK1、PDCD8等12个基因普遍下调,在1μmol/LAngⅡ作用12h时,呈相反结果。[结论]①AngⅡ可诱导ECV304细胞产生ROS(·OH),ROS(·OH)含量与Ang Ⅱ呈时间和剂量依赖性。②一定量的ROS(·OH)与ECV304细胞的增殖率呈显著负相关。③一定量的ROS(·OH)可引起多种与ECV304细胞增殖相关的靶基因表达。④抗氧化剂NAC可以减少ECV304细胞ROS(·OH)的含量,明显抑制Ang Ⅱ对ECV304细胞的增殖作用。⑤ROS(·OH)可能是AngⅡ诱导ECV304细胞增殖的主要信号转导分子和基因表达调节分子。
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